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肿瘤是一个具备明显异质性的群体,肿瘤干细胞(cancer stem cells, CSCs)作为其中的关键亚群在肿瘤发生、进展、治疗抵抗、复发等方面起到重要作用。其中,乙醛脱氢酶(Aldehyde dehydrogenase, ALDH)活性是近年来新发现的CSC标志物,ALDH参与调节细胞增殖、分化等多个重要过程,并逐渐作为干性相关指标判断肿瘤患者生存预后。ALDH家族包括19种亚型,各亚型表达呈现明显的肿瘤特异性及组织特异性。在胃癌方面,有报道ALDH+胃癌细胞具备一定的干细胞特性,然而尚没有关于胃癌中高活性ALDH亚型的研究。因此针对胃癌细胞中高活性ALDH家族亚型的分析对于探究其在CSC发生中的调节机制以及选择预后指标方面具有重要意义。本研究拟对胃癌细胞中高活性乙醛脱氢酶亚型进行分析并在组织层面分析其表达规律。研究方法：1、ALDH+亚群干细胞特性鉴定。1)采用AldeFluor染色及流式分选方法在MKN-45及SGC-7901胃癌细胞株中对ALDH+以及ALDH-亚群进行分选,并通过通过无血清成球培养法进行扩增。2)实时定量PCR及WesternBlot方法检测ALDH+亚群细胞干性相关基因Bmi-1、 Sox-2、Oct-4表达；3)成球培养法验证ALDH+细胞自我更新能力；4)采用血清培养法验证ALDH+细胞是否可发生分化；5)皮下移植瘤实验验证ALDH+细胞是否具备高成瘤能力。2、ALDH+亚群高表达ALDH3A1。1)采用实时定量PCR法分析该亚群中19种ALDH家族成员表达；2)采用si-RNA干扰ALDH3A1表达验证ALDH+亚群比例是否改变；3、ALDH3A1表达与胃癌组织分化程度相关。收集胃癌组织,采用免疫组化染色分析其高表达成员ALDH3A1在胃癌组织中的表达规律。研究结果：1、ALDH+亚群高表达干性相关基因,并具备自我更新、多向分化及高成瘤能力。1) MKN-45及SGC-7901胃癌细胞株中含较高比例ALDH+亚群,该亚群可通过无血清成球培养法进行扩增。2)实时定量PCR及WesternBlot方法检测发现ALDH+亚群细胞高表达干性相关基因Bmi-1、Sox-2、Oct-4;3) ALDH+细胞可以成球培养并连续传代；4) ALDH+细胞置于10%FBS培养基中培养后其干性标志CD44表达下降；5)移植瘤实验方面,相同数量级的细胞ALDH+细胞较ALDH+细胞具备更强的成瘤能力。2、ALDH+亚群高表达ALDH3A1。1)实时定量PCR法分析该亚群中19种ALDH家族成员表达,结果显示ALDH3A.1、 ALDH2、ALDH16A1以及ALDH18A1等多个成员表达升高,其中ALDH3A1表达升高最明显。2)进一步采用si-RNA干扰ALDH3A1表达后,ALDH+亚群比例下降。3、ALDH3A1表达与胃癌组织分化程度相关。在胃癌组织中,ALDH3A1随胃癌组织分化程度减低而表达升高。研究结论：1) ALDH+胃癌细胞具备一定的干细胞特性；2) ALDH3A1是ALDH+群体中高表达的成员,并参与ALDH+亚群的维持；3) ALDH3A1表达随胃癌分化程度降低而升高,或提示患者预后。