马杜霉素对HeLa细胞的生长抑制作用研究

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宫颈癌威胁着许多女性的身体健康,在大部分国家的女性恶性肿瘤中,宫颈癌的死亡率均排在前五,虽然适龄女性可以接种疫苗来预防大部分宫颈癌的发生,但是注射了疫苗不代表就不会患宫颈癌,近些年来世界上新增的宫颈癌患者以及因宫颈癌死亡的女性还很多,因此寻找生产成本低、疗效佳、毒副作用相对较小的抗宫颈癌药物具有极大的现实意义。马杜霉素是一种聚醚类离子载体药物,与其同属聚醚类离子载体药物的盐霉素已被证实具有抗癌活性,因此推测其也可能具有抗癌活性。本研究以人宫颈癌HeLa细胞作为研究对象,选取马杜霉素作为供试药物,探究其是否有抗癌活性,并初步探究其与癌细胞的作用机理。其中,MTT法、台盼蓝计数法以及集落形成实验应用于探究马杜霉素对细胞增殖的影响;荧光相差显微镜可以观察药物处理后HeLa细胞及细胞核形态的变化;琼脂糖凝胶电泳法检测DNA断裂;LDH释放检测细胞膜通透性;活性氧试剂盒检测ROS含量变化;流式细胞仪用于检测马杜霉素对细胞周期和凋亡的影响;caspase活性检测试剂盒检测马杜霉素对凋亡相关caspase酶活性的影响;Western Blot应用于分析细胞凋亡与自噬相关蛋白表达量的变化。细胞增殖实验结果表明,随着马杜霉素浓度的升高,人宫颈癌HeLa细胞的增殖抑制率升高;凋亡相关检测表明,马杜霉素处理后的HeLa细胞出现了典型的凋亡形态学及生化特征,无明显的细胞内容物外溢现象,细胞内ROS指标显著升高;流式细胞仪结果表明,与对照组细胞相比,经马杜霉素处理后,处于S期的HeLa细胞显著增多,且细胞凋亡率升高;caspase活性检测和蛋白质印迹结果表明,部分caspase抑制剂显著影响了马杜霉素抑制细胞增殖的能力,如caspase-3/4/8/9。与对照组相比,加入马杜霉素后HeLa细胞内caspase酶活和线粒体途径相关蛋白均有不同程度变化且自噬相关蛋白量增多。得出以下结论:(1)马杜霉素能够高效地抑制HeLa细胞的体外增殖,并且可将HeLa细胞阻滞于S期。(2)马杜霉素能够诱导活性氧蓄积。(3)马杜霉素可诱导多种caspase参与的HeLa细胞凋亡,线粒体途径及死亡受体途径可能均与该过程相关。(4)马杜霉素可诱导HeLa细胞自噬。
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