锡林郭勒马奶酒中酵母菌发酵特性优良株的选育

来源 :内蒙古农业大学 | 被引量 : 5次 | 上传用户:chengyao54321
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从采自内蒙古锡林郭勒地区马奶酒的5个样品中,共分离出120株酵母菌,通过WL营养琼脂的初步分类试验、形态学鉴定、初筛试验、生理生化试验及耐受性试验,最终筛选出1株优质酵母菌株。优质菌株进行诱变试验后,通过耐高渗(高糖)试验,确定1株最佳突变菌株。根据酒精发酵试验,确定其遗传稳定性,并对最佳突变菌株进行DNA测序试验。采用WL营养琼脂培养基对120株酵母菌进行分类,共分为8个类型,分别是类型Ⅰ为葡萄汁有孢汉逊酵母(Hansenlaspora uvarum),类型Ⅱ为异常汉逊酵母(Hansenulaanomala),类型 Ⅲ 为戴尔凯氏有孢圆酵母(Torulaspora delbrueckii),类型Ⅳ为酿酒酵母(Saccharomyccscerevisiae),类型V为路氏类酵母(Sccharomycodesludwigii),类型 Ⅵ 为粟酒裂殖酵母(Schizasaccharomyces pombe),类型Ⅶ和类型Ⅲ未确定所属类型。筛选试验结果表明,菌株A9的生长特性较好,在pH为1.5、葡萄糖(无水)浓度为54%、S02浓度为400mg/L、酒精度为18%及温度为43℃的条件下,生长情况均优于其他酵母菌株,并表现出较好的耐受性。A9紫外诱变的单因素试验中,于30W紫外灯下,距灯30cm处,诱变75s时,菌株致死率达78.9%,因此,最佳紫外诱变的时间为75s。A9硫酸二乙酯的单因素试验中,取浓度为1%的DES 5mL,加入到10mL菌悬液中,于35℃水浴振荡15min时,菌株致死率达76.1%,因此,最佳硫酸二乙酯的诱变时间为15min。通过3轮复合诱变试验,并根据耐高渗(高糖)筛选培养基,最终筛选出4株较好的突变菌株。将出发菌株A9与4株突变菌株共同进行耐高渗(高糖)试验,菌株A9-2的生长情况比出发菌株A9好,且优于其它突变菌株,确定突变菌株A9-2为最佳诱变菌株。酒精发酵试验表明,将A9和A9-2的3代、10代发酵液的相关指标做对比,A9-2的3代发酵液中,CO2的总失重量为13.86g,残糖量为13.7°Be,酒精度5.4%(v/v),突变菌株A9-2的发酵性能强于出发菌株A9,且3代发酵液与10代发酵液各项指标相似,确定突变菌株A9-2的遗传性能稳定。对最佳突变菌株A9-2进行26S rDNAD1/D2序列分析,确定突变菌株A9-2为马克思克鲁维酵母(Kluyveromycesmarxianus)。
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