南瓜抗白粉病相关基因的分离及功能研究

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南瓜是一种重要的蔬菜栽培作物,具有较高的经济价值。南瓜白粉病作为南瓜的主要真菌病害,带来严重的经济损失。目前,南瓜的主要栽培种大部分不具备白粉病抗性。化学药剂防治,易产生耐药性,造成环境污染。本研究以中国南瓜(C.moschata Duchesn)高抗白粉病自交系“112-2”和高感白粉病自交系“九江轿顶”为研究对象。分析“112-2”接种白粉菌后24h和48h的转录组数据,发现“112-2”接菌处理后5个DEGs(Differentially expressed genes,差异表达基因)与“九江轿顶”接菌处理表达量明显不同。采用同源克隆法分离抗性候选基因,利用实时定量技术进行不同处理的表达分析;通过农杆菌介导的叶盘转化法转化烟草,对转基因和未转基因烟草进行抗病性鉴定,分析信号转导相关基因表达模式,研究结果如下:(1)南瓜CmSGT1 ORF为1080 bp,编码360个aa。H2O2与SA处理诱导“112-2”中CmSGT1表达,抑制“九江轿顶”CmSGT1表达。烟草中超量表达CmSGT1促进H2O2积累,加速细胞坏死;烟草中超量表达CmSGT1诱导PAL和PR1a上调表达,表明CmSGT1可能通过SA信号转导途径参与抗白粉病反应。CmSGT1超量表达可降低烟草对青枯病和疮痂病的抗性。(2)南瓜CmPR1 ORF为597 bp,编码198个aa。CmPR1受南瓜白粉菌、Eth、MeJA诱导。CmPR1超量表达促进H2O2积累,加速细胞坏死;CmPR1超量表达诱导PAL、NPR1、PR5和PR1a上调表达,PDF1.2下调表达,说明CmPR1可能通过SA和JA信号转导途径参与对白粉病的抗性。CmPR1超量表达提高烟草对青枯病和疮痂病的抗性。(3)南瓜CmMYB1 ORF为858 bp,编码285个aa。CmMYB1受南瓜白粉菌处理诱导,MeJA、Eth抑制“112-2”中CmMYB1表达,诱导“九江轿顶”中CmMYB1表达。CmMYB1超量表达促进H2O2积累;诱导PR5上调表达,抑制PDF1.2表达,表明CmMYB1可能主要通过SA和JA信号转导途径来参与烟草对白粉病的抗性。(4)南瓜CmERF ORF为681bp,编码226个aa。CmERF受白粉菌诱导,MeJA和Eth诱导“112-2”CmERF表达,抑制“九江轿顶”CmERF表达。CmERF超量表达加速细胞坏死,诱导PAL、NPR1、PR1a上调表达,抑制PDF1.2表达,表明CmERF基因可能主要通过参与SA和JA信号转导途径来提高烟草对白粉病的抗性。CmERF超量表达降低了对青枯病和疮痂病的抗性。(5)南瓜CmbHLH87 ORF为1068 bp,编码355个aa。南瓜白粉菌和SA处理抑制“112-2”CmbHLH87表达。CmbHLH87超量表达促进H2O2积累,加速细胞死亡;诱导PAL、PR1a和PR5上调表达,抑制PDF1.2的表达,表明CmbHLH87基因可能主要通过参与SA和JA信号转导途径来提高烟草对白粉病的抗性。CmbHLH87超量表达提高对烟草青枯病和疮痂病的抗性。
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