自组装血清蛋白石英晶体微天平生物传感器在气相和液相体系的手性识别

来源 :华南师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:kongxiaojuan
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石英晶体微天平(QCM)传感器由于其能够实时在线、快速、灵敏、无需标记的检测生物和化学组分的特点,近年来成为一个研究的热点。血清蛋白是循环系统中含量最为丰富,研究最为深入的一种蛋白,是一类理想的手性选择剂。本文组装了一系列兔血清蛋白(RbSA)、羊血清蛋白(GSA)和牛血清蛋白(BSA)石英晶体微天平生物手性传感器用于实时的手性识别。同时运用紫外可见光谱和荧光光谱对手性识别的机理进行了探讨。  首先,采用自组装单层的方法成功组装了一系列血清蛋白(GSA,RbSA和BSA)生物手性传感器。运用石英晶体微天平流动注射分析体系(QCM-FIA)监测了血清蛋白组装到活化后的石英晶体表面的过程。根据石英晶体振动频率的变化计算可知,固定到QCM芯片金表面的GSA和RbSA的浓度分别为8.8×10-12mool·cm-2和1.2×10-11mol·cm-2。然后,应用这些羊、兔血清蛋白手性传感器在气相体系中对R,S-1,2,3,4-四氢萘胺(R,S-1-TNA)、R,S-1-(4-甲氧基苯基)乙胺(R,S-4-MPEA)、R,S-1-(3-甲氧基苯基)乙胺(R,S-3-MPEA)、R,S-2-辛醇(R,S-2-OT)、R,S-乳酸甲酯(R,S-MEL)这五对对映异构体进行了手性识别。根据传感器对对映异构体响应引起的频率的下降值计算得到手性识别因子αQCM。GSA手性传感器的手性识别因子从大到小依次为:R,S-1-INA(αQCM=1.34)>R.S-4-MPEA(αQCM=1.22)>R,S-MEL(αQCM=1.16)>R,S-2-OT(αQCM=1.12)>R,S-3-MPEA(αQCM=1.06).RbSA手性传感器的手性识别因子从大到小依次为:R,S-1-TNA(αQCM=1.28)>R,S-4-MPEA(αQCM=1.19)>R,S-2-OT(αQCM=1.14)>R,S=MEL(αQCM=1.11)=R,S-3-MPEA(αQCM=1.11).与本课题组之前研究的牛血清蛋白(BSA)和人血清蛋白(HSA)手性传感器的手性识别性能进行比较,发现这四种血清蛋白在药物立体选择性结合的方向和程度上均存在明显差异。  第二,采用QCM-FIA在液相体系中研究了BSA和RbSA手性生物传感器对RR,SS-匹多莫德(RR,SS-PDTM),D,L-丙氨酸(D,L-Ala)和D.L-精氨酸(D,L-Arg)的手性识别性能。对于BSA手性传感器,手性识别因子从大到小依次为:RR,SS-PDTM(αQCM=1.29)>D,L-Ala(αQCM=1.27)>D,L-Arg(αQCM=1.10).对于RbSA手性传感器的手性识别因子从大到小依次为:D,L-Arg(αQCM=1.18)>RR,SS-PDTM(αQCM=1.13)>D,L-Ala(αQCM=1.11)。BSA和RbSA手性传感器在手性识别的方向和能力方面均表现出了不同。  最后,采用了紫外光谱法(UV)和荧光光谱法(FL)对血清蛋白(GSA,RbSA和BSA)和八对手性对映异构体之间的手性识别机理进行了研究,UV和FL光谱的探测显示血清蛋白和对映异构体形成了复合物。深入研究显示紫外,荧光和QCM得到的结论是一致的。  研究表明组装的血清蛋白QCM手性传感器具有良好的灵敏性和选择性去识别手性对映异构体,在不久的将来,它有望成为一种简单的,快速和实时的手性识别方法。
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