粪肠球菌是一种普遍存在于人、动物肠道、口腔和生殖道的条件致病菌,可引发多种感染性疾病。由于抗生素滥用,粪肠球菌产生耐药性,使得临床上采用抗生素治疗粪肠球菌感染疾病变得十分困难,亟待开发全新治疗粪肠球菌感染的替代药物。裂解酶由噬菌体的基因组编码,在裂解周期后期产生,作用于细胞壁肽聚糖,破坏细胞壁结构,从而高效、特异杀死细菌;穿孔素是噬菌体感染后期编码的跨膜运输蛋白,以寡聚体形式聚集于细胞膜上形成跨膜通道,使细胞膜受损以释放裂解酶,进而引发细菌死亡。本研究以分离自口腔临床再治疗根管中的粪肠球菌YN771为宿主菌,对其噬菌体PEF771的裂解酶和穿孔素进行克隆、表达及纯化,验证抑菌活性、裂解谱及生物膜清除作用,构建SD大鼠腹腔感染模型评估裂解酶和穿孔素的治疗效果。主要研究结果如下:1.利用原核表达系统,成功表达裂解酶pEf51和穿孔素pEf191,并通过抑菌圈法和稀释涂布法验证其抑菌活性及裂解谱。pEF51（0.715 mg/mL）和pEf191（1.135 mg/mL）粗酶液具有高效抑菌活性,裂解谱远宽于亲本噬菌体。他们均明显抑制藤黄微球菌、蜡样芽胞杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和4株粪肠球菌。同时,对粪肠球菌形成的生物被膜均具有较好清除作用。2.SD大鼠腹腔感染模型研究表明:与对照组相比,pEf191组治疗72 h后,疗效同空白组一样,SD大鼠腹部组织及器官病变消失;pEf51组治疗72 h后,除1只SD大鼠出现胸腔包膜脓肿和脾脏包膜脓肿外,其余SD大鼠的主要器官正常。因此,pEf191能够很大程度地保护感染粪肠球菌的SD大鼠。3.利用Illumi-naMiSeq对治疗前后SD大鼠肠道菌群16S rDNA进行测序及分析,pEf191在门水平上对肠道微生物多样性几乎无影响,而且可以显著提高有益菌属—嗜黏蛋白阿克曼菌属的相对丰度,该菌属有助于改善肥胖、葡萄糖耐受和糖尿病炎症等症状,维持体内代谢平衡,能调节机体免疫应答;而pEf 51组出现了与胃肠道疾病相关的菌属—脱硫弧菌属和螺杆菌属。SD大鼠治疗前后肠道菌群变化分析进一步表明pEf 191粗酶液治疗粪肠球菌感染的效果更佳。综上所述,裂解酶pEf51和穿孔素pEf191具有广谱抑菌作用,能有效清除粪肠球菌和金黄色葡萄球菌形成的生物被膜;在治疗SD大鼠腹腔感染中表现出良好治疗效果,且对SD大鼠治疗后的肠道菌群多样性几乎未产生不利影响。因此,pEf51和pEf191在治疗粪肠球菌感染方面具有成为抗生素代替新型药物的潜力。