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瞬时受体电位香草酸3型受体（TRPV3）是温度敏感的、钙离子通透的非选择性阳离子通道,它广泛表达于皮肤角质细胞,在皮肤的生理病理中发挥重要作用:如毛发生长,瘙痒,特位性皮炎及皮肤屏障。TRPV3功能失调导致皮肤疾病:TRPV3功能获得性点突变（G573S,G573C,W692G等）造成Olmsted Syndrome（OS）,患者常见的病理特征为掌跖和口周表皮硬化,难以忍受的瘙痒和皮肤炎症,这暗示药理性抑制过度激活的TRPV3可能缓解皮肤瘙痒、皮炎等皮肤疾病。TRPV3可以被多种刺激激活,包括物理刺激,温暖的温度（33～39℃）,化学调节剂包括合成的小分子化合物2-APB,香芹酚,麝香草酚等;TRPV3的抑制剂则主要有镁离子,17（R）-resolvin D1,DPTHF,TRPM8激动剂icilin,钌红等,但目前几乎所有的TRPV3抑制剂均为非特异性的,这阻碍了对TRPV3的药理学及其在皮肤生理病理中作用的研究,因此亟需发现和鉴别TRPV3特异性的抑制剂。连翘酯苷B是西藏植物独一味树叶及连翘果实中的一种活性成分,这两种传统中药具有止痛、消肿、抗炎的药理活性,但其体内靶点及作用的分子机制仍未知。本研究主要评价了天然产物连翘酯苷B对TRPV3通道的抑制作用,并分别在体内体外实验中评价了其抗瘙痒和抗细胞死亡的作用。研究目的:筛选、鉴别TRPV3特异性抑制剂,并在体内和体外实验中评价其在TRPV3介导的皮肤瘙痒及角质细胞凋亡相关皮肤病中的作用,以进一步揭示TRPV3在皮肤生理病理中扮演的角色。研究方法:通过钙荧光Flexstation 3高通量筛选鉴别TRPV3特异性抑制剂并通过膜片钳电生理进行验证并进行选择性评价。体内实验中,利用干皮病慢性瘙痒模型和急性瘙痒模型对筛出的天然产物连翘酯苷B的抗瘙痒活性进行评价。在细胞水平评价连翘酯苷B对过度激活的TRPV3引发的细胞死亡的拮抗作用。研究结果:经钙荧光Flexstation 3鉴别出天然产物连翘酯苷B作为TRPV3的抑制剂,膜片钳电生理实验验证了连翘酯苷B选择性抑制2-APB（50μM）引发的TRPV3电流,IC50为6.7±0.7μM。体内实验中,无论是AEW诱导的干皮病小鼠模型,还是组胺或者TRPV3激动剂香芹酚诱导的急性瘙痒模型,连翘酯苷B都具有止痒作用。在细胞水平,连翘酯苷B可以在HEK293细胞和HaCaT细胞中拮抗TRPV3 G573S功能获得性点突变或TRPV3激动剂导致的细胞死亡。在HEK293细胞中,TRPV3 G573S点突变导致的细胞死亡中,钙离子下游的激酶CaMKII发挥重要作用。研究结论:1.天然产物连翘酯苷B是TRPV3的抑制剂,且相对于与瘙痒相关的其他TRP通道（TRPV1,TRPV4,TRPA1）来说,连翘酯苷B对TRPV3具有选择性,它对50μM 2-APB引发的TRPV3电流的IC50为6.7±0.7μM。2.在AEW诱导的小鼠干皮病模型中,连翘酯苷B可以剂量依赖地抑制小鼠的自发抓挠行为,且连翘酯苷B无镇定作用。3.在致痒原组胺和TRPV3激动剂香芹酚引发的急性瘙痒模型中,连翘酯苷B能够通过抑制TRPV3抑制小鼠的瘙痒行为。4.TSLP在香芹酚诱导的瘙痒中扮演一定角色。5.连翘酯苷B可以在HEK293细胞和HaCaT细胞中拮抗TRPV3功能获得性突变体导致的细胞死亡。6.连翘酯苷B通过抑制钙离子下游的CaMKII拮抗TRPV3突变体诱导的细胞死亡,且CaMKII特异性抑制剂也能减少这种细胞死亡,进一步说明了CaMKII的作用。7.连翘酯苷B可以在HEK293细胞和HaCaT细胞中拮抗TRPV3激动剂导致的细胞死亡。8.连翘酯苷B通过抑制TRPV3的活性缓解瘙痒及细胞死亡相关的皮肤疾病,展现了其在治疗皮肤疾病方面的巨大潜力。9.靶向钙相关的通路在治疗皮肤瘙痒、细胞死亡相关的皮炎或其他皮肤疾病中有一定潜力。