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随着农业化肥，工业防腐剂的广泛应用，自然界水体和土壤中氨氮，硝态氮，亚硝态氮含量逐年增加。亚硝酸盐是常见的亚硝态氮，硫酸铵是常用的化肥，近年来在环境中负荷不断加大。与此同时，流行病学研究显示，氨氮污染严重的地区癌的发病率和死亡率逐步增高，尤其是肺癌近年来最为严重。深入研究氨氮与肺癌的发生、发展关系有非常重要的意义。目的：选择肺癌为研究对象，氨氮及亚硝酸盐对于肺癌细胞演变的生物学作用。在模拟的肿瘤微环境中研究氨氮及亚硝态氮对于肺癌细胞的侵袭作用所起的作用。为进一步了解亚硝酸盐和肺癌的关系补充依据。方法：用小鼠成纤维细胞L929和小鼠肺癌细胞LLC细胞共培养，体外模拟肿瘤微环境，制作细胞模型。免疫细胞化学法检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达；以亚硝酸钠代表亚硝态氮，以硫酸铵代表氨氮。体外细胞增殖指标采用MTT细胞增殖活性；PI染色流式细胞术分析细胞周期；Hoechst33258荧光染色计数细胞分裂指数；细胞迁移和侵袭能力判定采用划痕实验和Transwell侵袭实验，结合细胞爬片细胞形态变化判定上皮间质转化（epithelial-to-mesenchymal transition，EMT）的发生。免疫荧光法检测活性氧的含量。结果：MTT结果显示：对LLC细胞，亚硝酸钠、硫酸铵、亚硝酸钠硫酸铵混合液有浓度依赖性增殖抑制作用（P<0.05），亚硝酸钠在0.8mg L-1-1.0mg L-1，细胞增殖有小幅增加；硫酸铵浓度在1.0mg L-1-1.8mg L-1，细胞增殖有小幅增加；亚硝酸钠和硫酸铵混合液对细胞增殖抑制作用明显比单纯亚硝酸钠组和硫酸铵组低（P<0.05）；对L929细胞，亚硝酸钠在0.8mg L-1-1.0mg L-1浓度范围内，硫酸铵在1.0mg L-1-1.8mg L-1范围内对细胞增殖有促进作用；对LLC或L929细胞的促增殖作用，相同剂量，相同时间条件下，硫酸铵作用强于亚硝酸钠（P<0.05）；亚硝酸钠或硫酸铵对L929细胞促增殖作用强于LLC（P<0.05）。将L929和LLC细胞共培养（L929-LLC）模拟肿瘤微环境，经免疫组化法检测到共培养体系中一些细胞的α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达呈阳性，证实这些细胞已转化为肿瘤相关成纤维细胞（carcinoma-associatedfibroblasts，CAFs）。经MTT结果显示对L929-LLC细胞，亚硝酸钠在0.8mg L-1-1.0mgL-1，对细胞增殖有促进作用；硫酸铵浓度在1.0mg L-1-1.8mg L-1，48小时，对细胞增殖有促进作用，亚硝酸钠或硫酸铵对L929-LLC细胞促增殖作用强于单独培养的LLC和L929细胞（P<0.05）；亚硝酸钠和硫酸铵混合液浓度在0.1mg L-1-1.8mg L-1对细胞增殖有促进作用，其中浓度在1.8mg L-1时，对细胞增殖促进作用最显著（P<0.05）；1.8mg L-1亚硝酸钠硫酸铵混合溶液（1:1）对L929-LLC细胞促增殖作用强于单独用硫酸铵组，而硫酸铵组又强于单纯亚硝酸钠组（P<0.05）。亚硝酸钠、硫酸铵、亚硝酸钠硫酸铵混合液对细胞增殖无抑制作用。分别将0.8mg L-1浓度的亚硝酸钠、1.0mg L-1浓度硫酸铵、1.8mg L-1亚硝酸钠和硫酸铵混合溶液加入L929-LLC中48小时，PI染色，流式细胞术分析发现：S期加G2期细胞所占比例分别为(9.13±1.54)%、(10.17±2.10)%、(16.32±1.13)%，与各自空白对照组相比，差异明显（P<0.05），其中，亚硝酸钠和硫酸铵混合溶液处理的L929-LLC细胞S期加G2期细胞所占比例高于硫酸铵组，而硫酸铵组高于单纯亚硝酸钠组（P<0.05）；Hoechst33258荧光染色，显微镜下计数细胞分裂指数发现：细胞分裂指数分别为(13.41±4.17)%、(15.2±3.75)%、(18.78±4.91)%，与各自空白对照组相比，差异明显（P<0.05），其中，亚硝酸钠和硫酸铵混合溶液处理的L929-LLC细胞分裂指数高于硫酸铵组，而硫酸铵组又高于单纯亚硝酸钠组（P<0.05）；倒置显微镜下发现:亚硝酸钠和硫酸铵混合溶液处理L929-LLC细胞48小时，大批细胞呈细长的梭形，梭形细胞数量明显比单纯硫酸铵组多，单纯亚硝酸钠组梭形细胞数相对较少；划痕实验结果显示：亚硝酸钠和硫酸铵混合溶液处理的L929-LLC细胞划痕愈合的相对距离高于硫酸铵组，而硫酸铵组又高于单纯亚硝酸钠组（P<0.05）；Transwell细胞侵袭实验显示：穿过基底膜的细胞数个数分别为90±2.94，114±3.43，132±3.96，与各自空白对照组相比，差异明显（P<0.05）。亚硝酸钠和硫酸铵混合溶液处理的L929-LLC穿膜细胞数高于硫酸铵组，而硫酸铵组高于亚硝酸钠组（P<0.05）。免疫荧光检测活性氧结果显示：亚硝酸钠组、硫酸铵组、亚硝酸钠和硫酸铵混合溶液组都明显高于空白对照组，亚硝酸钠和硫酸铵混合溶液处理的L929-LLC荧光强度高于亚硝酸钠组，而硫酸铵组高于亚硝酸钠组（P<0.05）。结论：1.亚硝酸钠和硫酸铵单独应用或混合应用，对L929-LLC共培养细胞有促增殖作用，亚硝酸钠和硫酸铵混合溶液促增殖作用强于单纯硫酸铵，亚硝酸钠促增殖作用相对较弱。2.亚硝酸钠和硫酸铵分别应用或混合应用诱导L929-LLC共培养细胞向梭形转化、迁移能力和侵袭能力增强，亚硝酸钠和硫酸铵混合溶液促迁移和侵袭能力强于单纯硫酸铵，亚硝酸钠促迁移和侵袭能力相对较弱。3.亚硝酸钠和硫酸铵分别应用或混合应用促细胞增殖和侵袭能力增强与其诱导L929-LLC共培养细胞活性氧产生增加有关。