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近年来,溶瘤腺病毒作为抗肿瘤基因治疗载体的研究不断深入,开发一种有效的溶瘤腺病毒治疗平台,使腺病毒的溶瘤性和基因的抗肿瘤作用相互促进,将极大呈现出病毒-基因治疗的潜力。这种疗法最明显的优势,就是利用携带抗癌基因的溶瘤腺病毒在肿瘤细胞内的特异性增殖及复制的特性,使抗癌基因的拷贝数大量增加,从而数百倍乃至上万倍地提高抗癌基因的表达水平,最终杀灭肿瘤细胞,达到治疗的目的。
本研究中克隆并改造了乳腺癌特异性启动子mHerDF3,用该启动子调控突变的腺病毒E1A和E1B基因表达,其中,突变的E1A 缺失了CR2 区,失去与pRb 结合能力,而E1B的55kd 失活,失去与p53的结合能力,从而构建了由mHerDF3 驱动突变型E1A和E1B 表达的增殖型腺病毒穿梭质粒pSCQ。然后,在pSCQ 中插入抗肿瘤基因hIL-24,构建了携带治疗基因的增殖型腺病毒穿梭质粒pSCQ-hIL24。穿梭质粒pSCQ和pSCQ-hIL24 分别与腺病毒骨架质粒pBHGloxdeltaE13Cre 共转染293 细胞,通过细胞内同源重组的方法获得重组病毒,分别命名为AdSCQ,AdSCQ-hIL24。重组病毒经PCR 鉴定包装成功后,感染细胞,通过Western blot,细胞病理效应,细胞活力测定等实验证实了所构建的溶瘤腺病毒载体AdSCQ 可特异性地在MUC1 阳性的肿瘤细胞中复制、增殖,裂解肿瘤细胞,而对正常细胞没有明显影响。说明所构建的增殖型腺病毒载体系统AdSCQ 具有一定的肿瘤特异性,对肿瘤的靶向基因治疗有重要意义。同时还构建了hIL-24基因的原核表达载体pET28a-hIL24,经IPTG 诱导成功表达了重组hIL-24 蛋白,并探索出其最佳诱导表达的条件,为hIL-24 蛋白的表达、纯化以及体外研究奠定了基础。