藏红花素对白血病K562细胞抑制作用的初步研究

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目的:在民间中药组方,藏红花曾被用于治疗慢性粒细胞白血病。研究表明,其有效成分藏红花素对肿瘤细胞具有强烈的细胞毒效应。通过本实验,以明确藏红花素对白血病K562细胞的增殖抑制的影响及其促进细胞凋亡的作用,为白血病的临床治疗提供依据。方法:无菌条件下配制藏红花素溶液,将实验分为A-E共五个组,藏红花素的终浓度分别为0、0.625、2.5、10mg/mL及药物对照组(硼替佐米400ng/ml)。采用血细胞计数板来计数不同浓度的藏红花素处理后的K562细胞,绘制经不同作用时间后细胞的生长曲线,并用光显微镜观察K562细胞的生长情况。用MTT法检测K562细胞增殖情况,计算K562细胞在不同浓度藏红花素作用不同时间后细胞生长抑制率。流式细胞仪检测不同浓度藏红花素作用不同时间下K562细胞的凋亡率及K562细胞胞周期分布情况。结果:1.经过观察细胞生长曲线及MTT法测K562细胞生长抑制率的结果显示:同一作用时间时,随着药物浓度的升高,K562细胞数目逐渐减少,细胞生长抑制率逐渐升高,以10mg/ml浓度时抑制率最高(各浓度组抑制作用均弱于药物对照组)。当藏红花素的浓度为().625、2.5mg/ml时,随药物浓度增加,细胞数目逐渐减少,细胞生长抑制率逐渐升高。当藏红花素浓度增至10mg/ml时,随着作用时间的延长,细胞数目也明显减少,细胞生长抑制率也明显升高;2.流式细胞仪检测K562细胞凋亡率,藏红花素作用24h时,随着药物浓度不断增加细胞凋亡率也随之升高,其中2.5mg/ml浓度组凋亡细胞比例最高,当藏红花浓度为10mg/ml时,凋亡细胞比例反而下降。藏红花作用36h、48h时,与作用24h结果类似;3.流式细胞仪检测藏红花素对K562细胞细胞周期分布的影响:藏红花素作用于K562细胞48h后,在0-2.5mg/ml浓度范围内,随着藏红花浓度升高,G0/G1期细胞数比例升高,以浓度为2.5mg/ml时G0/G1期细胞数比例最高。当藏红花素浓度升高至10mg/ml时,G0/G1期细胞数比例反而下降。结论:1.不同浓度藏红花素作用于K562细胞后,明显抑制了细胞生长,并呈剂量时间依赖关系。在0-2.5mg/ml药物浓度范围内,细胞凋亡率随着药物浓度的升高而增加,但在10mg/ml药物浓度下凋亡率反而呈下降趋势,表现为细胞坏死。即低浓度的藏红花素可以诱导K562细胞凋亡,而较高浓度的藏红花素则可通过细胞毒作用杀伤K562细胞。2.藏红花素可将K562细胞阻滞于G0/G1期,在2.5mg/ml时阻滞作用最明显。藏红花素浓度为10mg/ml时,G0/G1期细胞数比例反而下降,即药物浓度过高时,藏红花素对K562细胞主要为细胞毒性作用。
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