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血管生成素样蛋白家族(Angiopoietin-like proteins,ANGPTLs)是一类分泌型蛋白因子,参与血管生成、脂质合成、葡萄糖代谢及胰岛素敏感性等生理状况的调控。其家族成员ANGPTL8能通过抑制脂蛋白脂肪酶(Lipoprotein lipase,LPL)的活性,调节血液中甘油三酯(Triglyceride,TG)含量,影响脂肪组织对甘油三酯的转运与吸收,进而影响脂肪细胞的脂质积累。ANGPTL8的含量与高血脂症、动脉粥样硬化和糖尿病的发生密切相关。目前,关于ANGPTL8调控前体脂肪细胞分化与脂质沉积的分子机制尚不清楚。因此,本研究在建立牛前体脂肪细胞原代培养方法的基础上,利用腺病毒介导的过表达与慢病毒介导基因沉默技术,研究ANGPTL8影响牛脂肪沉积的作用机理。同时,在转录水平上初步探索ANGPTL8的表达调控模式,揭示其潜在的成脂相关转录因子结合位点。主要研究结果有:1.通过qRT-PCR技术对ANGPTL8基因的表达谱分析发现,ANGPTL8基因在成年牛的心、肝、肾、小肠、肌肉、脂肪组织中均有表达,脂肪组织的表达丰度显著高于其他组织;通过组织块法培养牛原代前体脂肪细胞并诱导分化,诱导分化过程中ANGPTL8表达水平随脂肪细胞分化成熟过程显著升高,其表达模式与脂蛋白脂酶(LPL)表达趋势一致。2.过表达ANGPTL8的牛前体脂肪细胞油红O染色结果表明,过表达ANGPTL8将导致细胞脂质积累能力显著增强,并将显著降低诱导过程中SREBP1、LPL基因的表达量,但对脂肪细胞分化标志基因PPARγ、C/EBPα没有显著性影响。3.克隆获得牛ANGPTL8基因上游启动子区不同缺失片段,双荧光素酶报告基因检测结果表明,ANGPTL8核心启动子区为-522~-885区域。生物信息学预测发现,ANGPTL8基因启动子区存在PPARγ、SREBP1、C/EBPα、Znf423转录因子结合位点,SREBP1与PPARγ结合区域缺失片段启动子活性显著降低,提示SREBP1与PPARγ能促进ANGPTL8基因转录。综上所述,本研究成功建立了牛前体脂肪细胞原代培养及诱导方法,获得了ANGPTL8组织与细胞表达谱,并构建了ANGPTL8过表达与干扰病毒载体,初步确定ANGPTL8基因促进牛前体脂肪细胞脂质积累,ANGPTL8基因的表达受SREBP1与PPARγ转录因子的调控,本研究结果为探究ANGPTL8调控前体脂肪细胞分化与脂质沉积的机制提供了理论基础。