黑面神主成分及抗慢性皮炎—湿疹药效学研究

来源 :广州中医药大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:qqtigert123
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目的:本论文通过黑面神茎、嫩枝叶中总黄酮类成分含量比较同时结合黑面神茎、嫩枝叶水提液和醇提液的体外抑菌作用对比研究,确定黑面神治疗皮炎湿疹皮肤病的有效药用部位及提取方式。在此基础上,对黑面神嫩枝叶水提物中表儿茶素含量测定方法进行考察及水提工艺的优化研究,为黑面神的质量控制提供依据。并进一步对嫩枝叶水提液抑菌有效部位进行筛选,通过对小鼠慢性皮炎-湿疹疗效观察,证实黑面神嫩枝叶水提物的治疗作用,并筛选其有效部位,为进一步研究黑面神抗慢性皮炎-湿疹药效作用机制及其新制剂的开发提供实验基础。方法:(1)采用紫外分光光度法(UV)对黑面神茎、嫩枝叶中总黄酮含量进行比较。以芦丁为对照品,Al(N03)3-NaNO2-NaOH系统显色法,测定波长为511nm。(2)采用高效液相色谱法(HPLC)对黑面神嫩枝叶水提物中表儿茶素含量进行测定。设计正交试验考察浸泡时间、溶媒倍量、提取时间和提取次数对表儿茶素含量的影响,优选水提工艺条件。(3)采用纸片扩散法对比黑面神茎、嫩枝叶水提液和醇提液对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌及白色念珠菌的体外抑菌作用,并采用试管二倍稀释法测定嫩枝叶提取液对敏感菌的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)。运用系统溶剂萃取法将黑面神嫩枝叶水提液分为氯仿、乙酸乙酯、水饱和的正丁醇及剩余水层部位,采用试管二倍稀释法分别进行四个不同极性部位对金黄色葡萄球菌、耐药金黄色葡萄球菌及铜绿假单胞菌的体外抑菌实验研究,用以筛选抑菌作用的有效部位,并测定对敏感菌的MIC和MBC。(4)通过对小鼠慢性皮炎-湿疹疗效的观察,确证黑面神嫩枝叶水提物的治疗作用并筛选其有效部位。采用2,4-二硝基氟苯(DNFB)诱导小鼠慢性皮炎-湿疹模型,将小鼠分为基质对照组,模型组,皮炎平组,各试药组,每组各10只。每日外用相应药物2次,连续使用12天。使用游标卡尺测量并计算左右耳厚度差;电子分析天平称重并计算耳肿胀度及肿胀抑制率;解剖胸腺、脾脏称重并计算相应指数;光学显微镜下观察小鼠耳组织病理学变化。结果:(1)茎、嫩枝叶中总黄酮含量分别为38.58mg·g。和79.16mg·g-1(2)表儿茶素在0.0066~0.2640mg·ml-1范围内线性关系良好。水提最佳工艺条件:嫩枝叶加20倍量水浸泡45分钟,80℃提取2次,每次1小时。所得表儿茶素含量为0.7031mg·g-1。(3)嫩枝叶水提液对金黄色葡萄球菌的MIC和MBC分别为15.625mg/ml和125mg/ml,抑菌率达257.0%;对铜绿假单胞菌的MIC和MBC均为125mg/ml,抑菌率达115.5%;对白色念珠菌无抑菌作用;而茎水提液对试验菌均无抑菌作用。嫩枝叶水提液乙酸乙酯部位对金黄色葡萄球菌、耐药金黄色葡萄球菌及铜绿假单胞菌三种试验菌的抑菌作用最强,其MIC均为62.5mg/ml, MBC均为250mg/ml;其次为水饱和的正丁醇部位,其对三种试验菌种的MIC分别为125mg/ml、25mg/ml和62.5mg/ml,MBC分别为500mg/ml、500mg/ml、250mg/ml;剩余水层部位对金葡菌和耐药金葡菌的MIC均为62.5mg/ml,对铜绿假单胞菌无抑菌作用;氯仿部位对试验菌种均无抑菌作用。(4)黑面神嫩枝叶水提物40g生药/(kg·d)-1能有效减轻慢性皮炎-湿疹小鼠耳组织增厚、肿胀,显著抑制免疫器官指数,改善其病理学改变,且显示剂量依赖性。黑面神嫩枝叶水提物乙酸乙酯高剂量组及正丁醇组可明显改善慢性皮炎-湿疹模型的鼠耳增厚,可显著抑制小鼠耳肿胀,抑制慢性皮炎-湿疹小鼠皮损中炎症细胞浸润,改善耳片病理改变,正丁醇组显著抑制小鼠免疫器官指数。而三氯甲烷部位和剩余水层部位对慢性皮炎-湿疹模型小鼠均无明显作用。结论:以上结果显示,黑面神治疗皮炎-湿疹皮肤病的有效药用部位为其嫩枝叶。黑面神嫩枝叶水提物抑菌有效部位及治疗小鼠慢性皮炎-湿疹有效部位为乙酸乙酯和正丁醇部位。本论文研究内容可为黑面神消炎止痒药理作用机制及其相关制剂的研制开发提供基础。
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