结直肠癌患者外周血CD4~+T细胞及其特异性转录因子和细胞因子的检测与临床意义研究

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背景:结直肠癌是临床上常见的胃肠道恶性肿瘤,严重威胁着人们的身心健康。以手术为主的结直肠癌综合治疗总体治疗效果不尽人意,目前越来越多的研究围绕结直肠癌患者的免疫状态及其机制展开,深入探讨结直肠癌发生发展过程中机体免疫系统的功能改变,并寻找新的免疫治疗方法。这将对提高结直肠癌的疗效和预后具有重要意义。目的:目前认为结直肠癌患者外周血中Th2细胞占优势状态,但对其他CD4+T细胞亚群的在结直肠癌发生发展过程中的功能知之甚少。本研究检测结直肠癌患者外周血CD4+T细胞亚群Th1、Th2、Th17和CD4+CD25+Treg细胞的功能改变以及各亚群特异性转录因子与相关细胞因子的表达水平,观察其与临床分期之间的关系,并初步探讨CD4+T细胞亚群在外周血分布的影响因素。方法:43名结直肠癌患者与30名健康体检志愿者作为研究对象。结直肠癌患者外周血Th1、Th2、Th17和CD4+CD25+Treg细胞占CD4+T细胞的比例运用流式细胞技术进行检测。分析研究对象的相关临床资料,包括:性别、年龄、术前癌胚抗原(Carcino-embryonic antigen, CEA)水平、肿瘤直径、肿瘤浸润肠壁深度、肿瘤分化程度、是否出现淋巴结转移、肿瘤病情分期等指标,探讨结直肠癌患者外周血各CD4+T细胞亚群比例分布与各项临床指标间的关系。采用实时荧光定量聚合酶链反应(Quantitative Real-time Polymerase Chain Reaction, QRT-PCR)技术,检测外周单个核细胞中各CD4+T细胞亚群特异性转录因子的基因相对表达量。血浆细胞因子的表达水平使用液相芯片技术与酶联免疫吸附测定(ELISA)方法准确定量测定。结果:结直肠癌患者外周血Th2细胞占CD4+T细胞的比例和Th2细胞特异性转录因子GATA-3的mRNA表达量均显著高于正常对照组(P<0.05)。Thl细胞和CD4+CD25+Treg细胞特异性转录因子(T-bet和Foxp3)的mRNA表达量均显著低于正常对照组(P<0.05),但Th1细胞和CD4+CD25+Treg细胞占外周血CD4+T细胞的比例在结直肠癌组与正常对照组差异无统计学意义(P>0.05)。Th17细胞占外周血CD4+T细胞的比例在结直肠癌组中显著升高(P<0.05),而其特异性转录因子RORγt的mRNA表达量与正常对照组相比则显著下调。多元线性回归分析发现,结直肠患者外周血中Th1和Th2细胞的分布与性别、年龄、术前CEA浓度、肿瘤直径、肿瘤浸润肠壁深度、肿瘤分化程度、是否出现淋巴结转移、肿瘤病情分期均无关。CD4+CD25+Treg细胞的数量与术前CEA浓度相关(t=2.237,P=0.038)和Th17细胞的数量与患者年龄密切相关联系(t=-3.98,P=0.002)。CEA阳性结直肠癌患者外周血CD4+CD25+Treg细胞比例显著高于CEA阴性结直肠癌患者(P<0.05)。血浆IL-17表达水平在肠癌组与正常对照组相比显著降低(P<0.05)。血浆TNF-a、IL-1β和IL-15表达水平在两组间无显著差异(P>0.05)。结直肠癌患者血浆IFN-γ、IL-4、IL-6和TGF-β1的表达水平与病程分期有关(P值均<0.05)。不同的CEA状态对血浆IL-13和TGF-β1的表达水平有影响(P<0.05)。两组研究对象血浆IL-23和IFN-β的浓度均低于试剂盒最低检测水平。结论:结直肠癌患者外周血中Th2细胞和Th17细胞比例明显升高,可能与结直肠癌患者免疫抑制,导致肿瘤发生、发展有关。结直肠癌患者血浆细胞因子的不平衡表达可作为机体免疫状态转换的指标。CD4+CD25+Treg细胞在CEA阳性与CEA阴性结直肠癌患者外周血分布的不平衡可能与CEA对外周血CD4+CD25+Treg细胞存在调节功能有关。
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