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动脉粥样硬化(Atheroscleorsis,AS)及其所引发的相关的临床后果,包括冠心病,心绞痛,已经成为现今社会威胁全人类健康安全的首要问题。近来,越来越多的研究指出AS是一种自身免疫性疾病,认为内源性抗原(如氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL),热休克蛋白(HSP60)等和外源性抗原(如微生物等)激活的以Th1为主的免疫炎性反应是导致AS发病的原因。树突状细胞(Dendritic Cells, DCs)作为人体内重要的专职抗原呈递细胞,在免疫炎性反应过程中发挥着重要的调控作用。药物普罗布考(Probucol),其降血脂和抗氧化的特性已被熟知,但其作为有效抗动脉粥样硬化药物的机理始终待进一步证实。本研究从细胞水平,动物模型水平等多角度研究了DCs在AS免疫机制中的作用,同时深入探讨了药物普罗布考抗动脉粥样硬化的机制。全文由如下二个部分组成：第一部分：普罗布考通过血红素加氧酶—1对氧化低密度脂蛋白诱导的人单核细胞来源的树突状细胞免疫功能成熟的影响目的：研究内源性抗原氧化低密度脂蛋白(oxidized-low density lipoprotein, ox-LDL)及普罗布考(probucol)对人单核细胞来源的树突状细胞(human monocyte-derived dendritic cells, h-monDCs)免疫功能成熟的影响以及其与血红素加氧酶1(Heme Oxygenase-1, HO-1), STAT/CIITA通路的相关性。方法：采用免疫磁珠方法分离人外周血CD14+单核细胞,经含rhGM-CSF (100ng/ml)和rhiL-4(20ng/ml)的RPMI1640培养基培养5天,使其分化为未成熟DC。分不同组别,予HO-1小干扰RNA(HO-1siRNA)或HO-1激动剂干预24小时,再加入普罗布考(50μg/ml)干预24小时,最后加入ox-LDL(50μg/ml)干预24小时后收集悬浮细胞。流式细胞术检测h-monDC成熟度表型(CD40,CD86,CD1a, HLA-DR), FITC-Dextran检测DC吞噬功能,ELISA检测细胞培养上清因子(IL-4,TNF-α)的浓度。Western Blotting方法分析HO-1,STAT1, Phospho-Stat1(Tyr701)表达水平。结果：(一)与对照组相比,ox-LDL可明显增加DC的免疫表型的表达(CD40,CD86, CD1a, HLA-DR),减弱DC的吞噬功能,抑制DC细胞抗炎因子(IL-4)的分泌,促进细胞促炎因子(TNF-α)的分泌(P<0.05)。而普罗布考可明显抑制DC的免疫表型的表达(CD40,CD86,CD1a,HLA-DR),增强DC的吞噬功能,促进DC细胞抗炎因子的分泌(IL-4),抑制细胞促炎因子的分泌(TNF-α)(P<0.05)。(二)与单纯普罗布考干预组相比,HO-1siRNA干预可部分阻断普罗布考对DCs所产生的上述作用：HO-1siRNA干预后,可上调DC的免疫表型的表达(CD40,CD86,CD1a,HLA-DR),减弱DC的吞噬功能,抑带DC细胞抗炎因子(IL-4)的分泌,促进细胞促炎因子(TNF-α)的分泌(P<0.05)。Western Blotting结果提示HO-1激动剂可上调HO-1表达,下调STAT1701磷酸化(Phospho-StatiTyr701)表达,但对STAT1表达未见明显影响；HO-1抑制剂可抑制HO-1表达,上调STAT1701磷酸化表达,对STAT1表达未见明显影响。同时,我们发现,普罗布考干预后可部分上调HO-1表达,下调STAT1701磷酸化表达,对STAT1表达不产生影响。结论：ox-LDL是h-monDC免疫成熟和功能的重要刺激因素。普罗布考可通过上调HO-1,及STAT1/CIITA通路部分阻断ox-LDL诱导的DC的免疫成熟,这可能是其抗动脉粥样硬化的一个重要机制。第二部分：普罗布考通过抑制树突状细胞成熟在LDLR-/-小鼠中发挥抗动脉粥样硬化的作用目的：研究普罗布考对高脂喂养LD LR-/-,小鼠抗动脉粥样硬化的作用,探讨普罗布考是否通过抑制树突状细胞成熟在LDLR-/-小鼠体内发挥抗动脉粥样硬化的作用。方法：12只7周龄LDLR-/-雄性小鼠予以高脂喂养,随机分为2组：(1)高脂饮食对照组：喂养普通高脂饲料；(2)高脂+普罗布考干预组：喂养高脂+普罗布考(0.5%)饲料。18周后取材,进行主动脉和主动脉根部斑块油红O染色,同时对主动脉根部斑块进行CD11c免疫荧光染色,共聚焦显微镜下检测斑块内的树突状细胞的表达差异。另外,检测两组高脂小鼠的总胆固醇,高密度胆固醇等血脂指标。最后,分离高脂对照组,高脂+普罗布考组小鼠脾脏及腹股沟淋巴结等二级淋巴器官,研磨,滤过,得淋巴细胞悬液,进行CD11c免疫磁珠分离得CD11c+树突状细胞,经流式细胞仪进行检测,通过检测CD40、CD80、CD86、MHC-Ⅱ等树突状细胞免疫表型标志,观察树突状细胞的成熟度变化；通过ELISA试剂盒检测小鼠血浆中IL-12p70炎性因子水平。结果：与高脂饮食对照组相比,普罗布考能明显降低高脂喂养LDLR-/-小鼠的主动脉和主动脉根部斑块面积。共聚焦显微镜下观察免疫荧光染色发现,在高脂喂养小鼠动脉内膜中,可见明显粥样硬化斑块,且树突状细胞(CD11c+)主要分布在内膜的斑块区域；而普罗布考喂养小鼠组内,斑块面积内树突状细胞(CD11c+)表达明显减少至消失。血脂检测发现,与高脂对照组相比,普罗布考干预组小鼠的总胆固醇明显下降,HDL-C则明显升高(P<0.05)。与高脂对照组相比,普罗布考组小鼠脾脏及二级淋巴器官中的树突状细胞成熟标志物CD40、CD80、CD86,MHC-Ⅱ明显下降(P<0.05),同时,普罗布考组小鼠血清炎性因子IL-12p70水平受明显抑制(P<0.05)。结论：高脂对照组LDLR-/-小鼠动脉内可见明显动脉斑块及树突状细胞表达。而普罗布考可明显抑制小鼠动脉内动脉斑块表达及抑制树突状细胞表达。另外,普罗布考可抑制血浆中的胆固醇,升高HDL-C水平,起抗动脉粥样硬化作用。对脾脏及二级淋巴器官分离CD11c+树突状细胞的免疫功能检测发现,普罗布考可明显抑制CD11c+树突状细胞免疫功能成熟：CD80(63251±9221vs.97794±1101)),CD86(82525±26765vs.164460±2807),CD40(54617±2222vs.96223±15687)and MHC-II(P<0.05),下调血浆中的IL-12炎性因子(21.2±7.5Vs.97.1±3.0pg/ml)(P<0.05),进一步发挥抗动脉粥样硬化的作用。