猪链球菌2型在缺铁和感染猪肺组织上调表达基因的筛选与功能研究

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猪链球菌2型(Streptococcus suis serotype 2,SS2)是一种重要的人畜共患病原菌,能引起猪的败血症、脑膜炎、肺炎和关节炎等病理变化,导致生猪发病死亡,给世界养猪业造成巨大的经济损失。同时,SS2还可以引起特定人群感染和发病,导致人脑膜炎、严重的败血症休克和死亡。病原菌感染宿主的过程是一种适应宿主体内环境而存活、定植、复制,并造成机体组织损伤的过程;病原菌必须调整其基因表达来适应体内、外环境的变化,从而实现感染和致病,因此,研究病原菌在体内、外的基因表达调控规律对揭示其致病机理和防治策略的制定具有重要意义。本研究运用转录序列选择性捕获(SCOTS)技术来研究SS2在感染猪肺组织中和体外缺铁条件下的基因表达调控,鉴定出145个上调表达基因,并对部分基因的功能进行了初步研究。1.SS2在感染猪肺组织中的基因表达调控:将SS2强毒株SC-19经鼻内接种35日龄健康仔猪,三天后取感染猪的肺脏,提取总RNA,运用SCOTS技术比较SS2在体内、外的基因转录谱,鉴定出82个SS2在感染猪肺组织中表达上调的基因。根据功能可将它们分为五大类:34个基因与代谢相关,14个基因参与细菌细胞壁的构建,8个转运子基因,23个基因与细胞复制相关以及3个功能未知基因。在筛选到的基因中,潜在的毒力基因可能与翻译水平或后翻译水平的蛋白质修饰相关,如gidA和ssp。基因ldh和pbp2A的表达产物可能干扰宿主对SS2的清除。另外,western blot实验结果表明上调表达基因SSU051311编码的蛋白Hp1311为细菌细胞壁蛋白,其N端肽段可黏附HEp-2细胞为间接免疫荧光实验结果所证明。实验中筛选出来的这些有意义的基因为进一步研究它们的功能以及在致病过程中所发挥的作用打下了基础。2.SS2在体外贫铁培养条件下的基因表达调控:为了研究SS2在缺铁条件下的基因表达情况,将SS2培养于体外缺铁培养基中,用SCOTS技术鉴定出63个SS2在缺铁条件下上调表达的基因,其中23个基因参与细胞代谢,22个基因与细胞复制和基因表达相关,8个基因参与细菌细胞壁的合成,5个基因编码转运子,4个基因编码转录因子,1个基因功能未知。SS2通过调节生理代谢活动来适应缺铁环境,这一点可以从几个关键基因的上调表达上体现出来,如参与严谨反应的relA基因,精氨酸脱亚氨酸酶系统中的arcA基因以及编码细胞壁蛋白的cpdB基因,这些基因在SS2或其他细菌中都被报道与毒力相关。此外,荧光定量RT-PCR进一步证实,fur、fhuGBDA等铁代谢相关基因在缺铁条件下也上调表达。这些基因的鉴定有助于进一步研究SS2等革兰氏阳性细菌的铁代谢及其生物学意义。
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