单细胞酶传感器的制备及应用

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本论文用研制的单细胞酶传感器对单个嗜酸性粒细胞的释放物-H2O2进行了研究。论文分为两章:第一章,单细胞酶传感器的制备、表征及简单应用。第二章,单细胞酶传感器用于单个嗜酸性粒细胞受PMA刺激所释放的H2O2的定量检测。 第一章利用光刻和化学腐蚀的技术首先在玻璃平板上加工一个纳升的微池阵列,用推片法将单个中性粒细胞置入微池中,并用变性胶原固定,然后用毛地黄皂苷(Dig)进行细胞蚀孔,最后微池中加入支持电解质并插入一支复合微电极,制成单细胞酶传感器。复合微电极由金(Au)圆盘工作电极和Ag/AgCl微参比电极组成,其中Au圆盘电极的直径为20μm左右,Ag/AgCl参比电极的直径为100μm左右。该复合电极是将两支电极放入一支θ管内制成的,其尖端不到200μm,以适合微池内检测微量物质的需要。单细胞传感器对H2O2的测定原理是:利用传感器上中性粒细胞中所含的过氧化物酶(PO)能够催化过氧化氢(H2O2)和氢醌(H2Q)的化学反应,生成酶促反应的产物—苯醌(BQ)和水,利用微电极对电活性产物BQ的伏安检测,最终实现对H2O2的测定。制作好的单细胞酶传感器用于H2O2的测定,重现性良好,结果满意。本章有两个难点,一是在复合电极制作过程中要将工作电极和微参比电极完好地插入θ管内,两者互不接触,θ管尖端封胶要均匀,不能碰坏电极,能有效防止溶液进入θ管内部;二是利用光刻和化学腐蚀法制备微池阵列,并把单个中性粒细胞固定在微池底部。 第二章建立了单细胞酶传感器定量检测单个嗜酸性粒细胞的释放物的新方法。通过推片法将人的单个嗜酸性粒细胞转移到已装配有单细胞酶传感器的微池中,用自制的纳升加样器加入含有化学物质佛波酯(PMA)的反应液对嗜酸性粒细胞进行刺激,刺激时间120分钟,使其释放出H2O2,用单细胞酶传感器对释放物-H2O2进行测定。测定的原理是:受PMA的刺激后,嗜酸性粒细胞能够释放出活性氧物质,其稳定存在形式是H2O2。释放产生的H2O2在PO催化下与
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