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目的:急性肺损伤(acute lung injury, ALI)/急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome, ARDS)是指由心源性以外的各种肺内、外致病因素导致的急性、进行性呼吸衰竭。引起ALI/ARDS的原因或高危因素很多,可以分为肺内因素(直接因素,如重症肺炎)和肺外因素(间接因素,如败血症)。炎症反应、肺组织损伤和纤维化是ARDS主要的发病机制和病理改变,糖皮质激素(glucocorticoids, GCs)具有抑制炎症反应、减轻细胞因子对肺组织的损伤和抑制纤维化等作用,理论上来说,激素治疗ARDS应有较好的效果。但事实并非如此,临床发现不同诱因的ALI患者对激素治疗的反应存在较大差异。糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor, GR)表达水平的不同,可以影响GCs的疗效。这可能是导致激素治疗效果差异的机制之一。因此,本研究复制了脂多糖(Lipopolysaccharide, LPS)及大肠杆菌(Escherichia coli, E.coli)诱导的急性肺损伤动物模型,比较两种动物模型中细胞因子TNF-α和IL-1β的含量、NF-κB P65和GR的表达水平及GCs干预治疗对两种动物模型中上述指标的影响以探讨不同诱因所致ALI的炎症机制和激素治疗效果的差异及其潜在机理,为临床选择性、合理性应用糖皮质激素治疗不同诱因引起的ARDS提供理论依据。方法:健康雄性SD大鼠48只,随机分为6组:①NS组:尾静脉注射生理盐水1ml②LPS组:尾静脉注射LPS (8mg/kg)③E.coli组:气道内缓慢滴注大肠杆菌标准菌株悬液(5.0×109cfu/ml, 3ml/kg)④NS+Dex组,⑤LPS+Dex组,⑥E.coli+Dex组,每组8只动物。④、⑤、⑥三组为激素干预组,造模后立即腹腔注射地塞米松(Dexamethasone, Dex)(2mg/kg)。LPS,生理盐水造模4小时后,大肠杆菌造模24小时后取材测定相应指标。10%水合氯醛腹腔注射麻醉(3ml/kg),股动脉放血收集血液,离心(3000rpm, 4℃, 10min),吸取上清,-80℃保存,检测血清中TNF-α、IL-1β的含量。开胸处死动物后,取右肺中叶,10%中性福尔马林溶液固定,常规石蜡包埋HE染色,观察肺组织病理形态学变化并评分,石蜡包埋切片SP法染色,观察NF-κB P65及GR阳性细胞表达部位;取右肺下叶液氮冻存做蛋白印迹。经气管插管行左肺支气管肺泡灌洗,取支气管肺泡灌洗液(Bronchoalveloar lavage fluid, BALF),离心(1200rpm, 4℃, 10min),吸取上清,-80℃保存,检测BALF中TNF-α、IL-1β的含量。细胞沉淀悬浮于200μl生理盐水中,进行白细胞计数。结果:(1)LPS组和E.coli组BALF中细胞总数均高于NS组(分别为36.22±5.60,366.97±31.63 vs 13.06±1.94, P<0.01),且E.coli组高于LPS组(P<0.01)。在LPS+Dex组和E.coli+Dex组BALF中细胞总数均有显著下降(分别为19.34±2.61 vs 36.22±5.60和247.25±22.16 vs 366.97±31.63, P<0.01)。(2)LPS组和E.coli组光镜下肺组织病理评分明显高于NS组(P<0.05),而两个肺损伤模型组之间无差别(15.38±1.06 vs 15.88±1.73, P>0.05)。肺组织病理评分在LPS+Dex组显著低于LPS组(12.13±0.99 vs 15.38±1.06, P<0.01),而E.coli+Dex组与E.coli组病理评分无统计学意义(14.25±1.75 vs 15.88±1.73, P>0.05)。(3)LPS组和E.coli组NF-κB P65阳性细胞表达显著高于NS组(分别为34.08±3.82, 36.33±4.05 vs 3.11±1.10, P<0.01)。与LPS组相比,LPS+Dex组染色明显变浅,阳性反应明显减轻(26.14±3.91 vs 34.08±3.82, P<0.01),而E.coli+Dex组与E.coli组相比染色及阳性反应无明显改变(35.10±4.22 vs 36.33±4.05, P>0.05)。LPS组和E.coli组GR阳性细胞表达显著低于NS组(分别为20.80±0.88, 18.06±1.67 vs 28.86±3.14, P<0.01)。与LPS组相比,LPS+Dex组阳性反应明显增高(24.58±2.67 vs 20.80±0.88, P<0.01),而E.coli+Dex组与E.coli组相比染色及阳性反应无明显改变(17.49±2.69 vs 18.06±1.67, P>0.05)。(4)蛋白印迹结果显示,NS组NF-κB P65条带颜色与两模型组相比较浅,LPS模型组与相应的Dex治疗组相比颜色较深,E.coli模型组与相应的Dex治疗组相比条带颜色无明显变化。NS组GR条带颜色与两模型组相比较深,LPS模型组与相应的Dex治疗组相比颜色较浅,E.coli模型组与相应的Dex治疗组相比条带颜色无明显变化。(5) LPS组和E.coli组血清和BALF中TNF-α及IL-1β含量显著高于NS组(P<0.01)。LPS+Dex组血清和BALF中TNF-α及IL-1β含量低于LPS组(P<0.05)。E.coli+Dex组血清和BALF中TNF-α含量及IL-1β含量与E.coli组相比无差别(P>0.05)。结论:1大鼠气道注射大肠杆菌标准菌株悬液可以造成肺内直接感染引起的ALI/ARDS模型。2肺内因素及肺外因素所致ALI/ARDS在肺组织NF-κB P65和GR表达水平及肺内与外周血细胞因子TNF-α、IL-1β水平方面均存在一定的差异,说明ALI/ARDS的炎症机制与致病因素是紧密相连的。3激素治疗肺内因素及肺外因素所致ALI/ARDS的疗效不同,激素能在一定程度上减轻LPS组的肺损伤程度,但对于E.coli组的治疗基本无效。这可能与两种模型的致病因素及发病机制不同有关。