论文部分内容阅读
背景骨肉瘤是临床常见的原发恶性骨肿瘤，高发于青少年，致死率高，手术及辅助治疗后40%的患者仍出现了复发和转移。而骨肉瘤的生物学治疗因缺乏特异性肿瘤抗原而未见明显进展。本课题组在前期工作中通过SEREX方法，获得并鉴定了一种新型骨肉瘤相关抗原基因PBF。乳头瘤病毒结合因子（Papillomavirus BindingFactor，PBF）是一个含513个氨基酸可编码一个锌指结构的核质穿梭蛋白。它曾被证明是一种骨肉瘤相关抗原，能被自体毒性T淋巴细胞克隆所识别。基于前期研究基础，本试验拟设计阐明PBF在骨肉瘤组织中的表达，进一步探索其对骨肉瘤细胞生物学功能的影响。目的本实验的目的是探讨PBF在骨肉瘤组织中的表达情况，分析其与骨肉瘤之间的相关联系；构建PBF表达载体，通过转染改变细胞中PBF基因的表达水平，进而观察研究该基因对骨肉瘤细胞的生物学功能会产生怎样的影响，为PBF作为一种骨肉瘤早期诊断、预后判断及特异性治疗的肿瘤相关性抗原提供理论和实验依据。方法1.免疫组织化学法检测PBF在70例骨肉瘤和30例骨软骨瘤组织标本中的表达水平，采用统计方法分析PBF表达与骨肉瘤发生发展之间的关系及意义。2.构建PBF过表达载体，并将其转染到U2OS骨肉瘤细胞中，利用Western-blot方法检测转染过表达载体后细胞中PBF的表达情况。3. MTT法绘制细胞增殖曲线检测过表达PBF对骨肉瘤细胞的增殖能力的影响；Transwell实验检测过表达PBF对骨肉瘤细胞的转移能力的影响。结果1.免疫组化结果发现：PBF在骨肉瘤中的阳性表达率为88.62%(62/70)，在骨软骨瘤中的阳性表达率为10%(3/30)。PBF在骨肉瘤中的阳性表达率显著高于骨软骨瘤，两者之间差异具有统计学意义(P<0.01)。PBF的表达与骨肉瘤患者的外科Enneking分期及是否出现转移等因素呈正相关。2.成功构建PBF过表达载体，Western-blot方法检测出使用PBF过表达载体结合脂质体转染U2OS后，细胞内PBF蛋白水平较对照组的细胞表达上调。3. MTT检测结果发现：上调PBF表达后，实验组U2OS细胞的增殖能力较对照组及空白组显著增强。4. Transwell实验结果发现：上调PBF表达后，实验组U2OS细胞的迁移和侵袭能力较对照组及空白组显著增强。结论1.在骨肉瘤组织中，PBF呈现阳性表达，且其表达水平与骨肉瘤的恶性分期﹑转移情况等相关。2.过表达骨肉瘤细胞U2OS中的PBF后，细胞的增殖、迁移、侵袭能力增强。3. PBF可能成为骨肉瘤诊断及预后的相关靶向抗原；为进一步探索PBF参与骨肉瘤细胞生物学功能相关分子机制的研究提供了研究基础。