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中性粒细胞又称为多形核白细胞(polymorphonuclear neutrophils,PMNs)。PMNs是机体抵御微生物病原体入侵的第一道防线。PMNs的灭菌方式主要分为吞噬灭菌和形成胞外菌网(neutrophil extracellular traps,NETs),后者的效率远远高于前者。一个多世纪以前就发现了吞噬灭菌,但NETs是在2004年才被发现。吞噬灭菌主要通过呼吸爆发进行的,本实验室前期实验已经发现低强度He-Ne激光可以通过光信号转导诱导PMNs的呼吸爆发。Fuchs等人证明了H2O2在NETs的形成中发挥着关键作用,但其具体机制还不清楚(Fuchs et al.,2007)。本课题研究微管在PMNs形成NETs过程中的作用以及低强度650nmGalnP/AlGaInP半导体激光(lpw intensity 650 nm GalnP/AlGaInP diode laser irradiation,LGDL)对PMNS产生NETs的调节。
研究了微管在NETs形成过程中的作用,首先分别用1.0μM、10μM、20μM、40μM的紫杉醇作用于PMNs,稳定微管,用葡萄糖氧化酶(glucoseo xidase,GO)诱导PMNs使其产生NETs,结果显示紫杉醇处理组和对照组(无紫杉醇处理组)NETs的生成量没有显著性差异。另外,分别用0.1μM、1μM、10μM、100μM的秋水仙素作用于PMNs,解聚微管,用GO诱导PMNs使其产生NETs,结果显示随着秋水仙素量的增加生成NETs的量有增加的趋势,且10μM~100μM的秋水仙素作用于PMNs后生成NETs的量和对照组(无秋水仙素处理组)相比有显著差异,即生成NETs的量增加显著。
研究了LGDL对NETs形成的康复作用。用地塞米松(dexamethasone,Dex)处理PMNs,然后用GO模拟细菌诱导产生NETs,结果显示Dex处理组比对照组(无Dex处理组)NETs的生成量少,有显著性差异。因此,Dex诱导的PMNs形成NETs功能低下可以作为细菌性炎症的ex vivo PMN模型(ex vivo PMN model of inflammation,ePMI)。以Dex作用于PMNs建立ePMI,直接用强度为O.2mW/cm2、0.3mW/cm2、0.4 mW/cm2、3.0mW/cm2的LGDL连续照射150秒,强度为0.4mW/cm2的照射组的NETs的生成量比对照组(无激光处理组)明显增多,有显著性差异;建立ePMI后,以强度为O.4mW/cm2的LGDL连续照射150秒,接着加入GO,NETs的生成量比对照组(无激光处理组)明显增多,有显著性差异。
实验结果表明,微管的解聚是NETs生成过程中重要的环节,低强度激光能促进ePMI产生NETs。本实验不但为进一步研究NETs的形成机制打下基础,而且为低强度激光治疗细菌感染性疾病提供了新的作用机制。