Vasohibin1、VEGF及Glut--1基因在结直肠癌组织中的表达及其临床意义

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目的:肿瘤在生长及转移过程中伴随着大量新生血管的生成及糖代谢增加。血管新生需要血管生长促进因子及血管抑制因子共同作用,血管内皮生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF)是最重要的血管生长促进因子,它主要通过刺激内皮细胞(Endothelial Cells,ECs)的增殖和迁移促进新生血管的形成,而血管生长抑制因子则有新近发现的血管生长抑制因子(Vasohibin,VASH),包括VASH1及VASH2。糖代谢增加则与葡萄糖转运蛋白表达上调关系密切,目前已发现的葡萄糖转运蛋白(glucose transporter,Glut)有8种不同功能的亚型,其中跨膜转运能力最强的为Glut-1,在恶性肿瘤组织中,肿瘤细胞中Glut-1基因的表达增多,导致细胞外葡萄糖向细胞内转运增多,从而增强细胞增殖,促进肿瘤生长。本文旨在通过qRT-PCR和免疫组织化学SP染色法分别检测结直肠癌组织及其癌旁正常组织中VASH1、VEGF、Glut-1的mRNA和蛋白的表达,并结合临床病理资料分析其与结直肠癌发生、发展、侵袭和转移的关系。  方法:选取扬州大学临床医学院(江苏省苏北人民医院)胃肠外科2014年3月~2015年3月行手术治疗的64例结直肠癌组织和癌旁正常组织标本(距离癌组织边缘5cm以上)。所有患者术前均未接受过化疗、放疗及生物治疗,所有标本均由术后病理确诊并有相应的临床病例资料。所有大体标本均在术中切下后半小时内切取,并均分成两份,一份迅速置入液氮后转-80℃冰箱冻存;另一份浸入福尔马林溶液固定后放入4℃冰箱保存。应用免疫组织化学(Immunohistochemical,IHC)染色法检测VASH1、VEGF、Glut-1蛋白在组织中的表达情况;应用Quantitative Real-time PCR(qRT-PCR)检测VASH1、VEGF、Glut-1mRNA的表达情况及其与临床病例特征的关系。  结果:VASH1、VEGF、Glut-1在癌组织中的表达均高于癌旁正常组织,三者在癌组织中的表达与浸润范围、淋巴结转移、有无远处转移、病理分期相关,其表达随浸润范围的增加、淋巴结转移的增多逐渐上调(均P<0.05),而与患者年龄、性别、肿瘤直径、肿瘤分型、有无血管侵犯无相关性。VASH1表达与VEGF、Glut-1互呈正相关(r=0.9058,p<0.001;r=0.9251,p<0.001;r=0.9468,p<0.001)。生存分析提示N分期、TNM分期、及VASH1、VEGF、Glut-1是否阳性表达是影响生存率的危险因素,具有统计学意义(P<0.05);而性别、年龄、肿瘤大小、分化程度、T分期、M分期与生存率的影响无统计学意义。进一步将危险因素纳入Cox回归分析中,TNM分期、VEGF阳性表达是影响生存预后的独立的危险因素(P<0.05)  结论:结直肠癌组织中VASH1、VEGF、Glut-1的mRNA和蛋白表达水平高于癌旁正常组织;VASH1表达与肿瘤的分化程度、TNM分期、T分期、淋巴结转移、远处转移相关;VEGF表达与肿瘤的分化程度、TNM分期、T分期、淋巴结转移、远处转移相关;Glut-1表达与TNM分期、T分期、淋巴结转移、远处转移相关;VASH1、VEGF、Glut-1在结直肠癌组织中的表达水平互呈正相关;VASH1、VEGF、Glut-1是否阳性表达是影响生存率的危险因素,TNM分期、VEGF阳性表达是影响生存预后的独立的危险因素。
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