神经节苷脂 GM3作为生理性促分化剂已在多个瘤株模型中得以证实,但其诱导分化的详细机制仍不清楚。我们前期工作发现,GM3 诱导人单核样白血病 J6-2 细胞沿单核/巨噬细胞途径分化的同时,可抑制J6-2 细胞表皮生长因子受体(EGFR)磷酸化活化,从而下调细胞内 PLCγ/DAG/ PKCα信号通路。同时也有不少作者报导了 GM3对其它细胞EGFR 也有抑制作用。但其抑制机制至今仍不清楚。近年来,细胞膜脂筏理论的提出,为进一步深入研究细胞信号跨膜传递的分子机制开辟了新的途径。已知脂筏对 EGFR 主要起负调作用,促进 EGFR 在脂筏中的分布,可抑制 EGFR 与配体结合及活化。因此本文着重观察了 GM3对 EGFR 在脂筏内外分布的影响,及对 EGFR 的酪氨酸残基磷酸化影响情况,进一步揭示 GM3抑制 EGFR 磷酸化的分子机制。 要研究 GM3对 EGFR 在脂筏内外分布的影响,其前期工作就是脂筏的制备与鉴定。通常我们是利用脂筏在低温下不溶于非离子去垢剂这一特性,采用蔗糖密度梯度超速离心对其进行分离。然后将脂筏富含的神经节苷脂 GM1作为脂筏的标志分子,采用标记的霍乱毒素-B 亚基(cholera toxin B subunit,CTB)对其进行亲和标记,以确定脂筏在离心后各部分样品中的分布。由于此方法操做复杂,费时,易对环境造成污染。为此,我们对不同组织细胞的脂筏组分进行了分析研究,创建了一种新的鉴定脂筏的方法。