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平贝母是我国东北地区常见的一种天然药用植物资源,为百合科贝母属植物。平贝母主要功效成分为生物碱,这些生物碱有明显的镇咳、祛痰、平喘等功效,对呼吸道疾病有较好的治疗作用。因此深入研究平贝母的功效成分的提取、纯化及其功效评价可为医药及保健食品加工提供技术参考,并对进一步开发利用这一资源起到较好的促进作用。
本课题来源于黑龙江省科技攻关项目:《北药功能成分的提取在保健食品中的应用研究》(编号为GC04C50102),以黑龙江地产平贝母的干燥鳞茎为研究对象,对平贝母中总生物碱的提取、分离纯化、体外抑菌活性进行了研究,主要研究内容及结果如下:
1.平贝母中生物碱含量测定方法的研究用酸性染料比色法对平贝母样品中总生物碱的含量进行了测定,测定结果:平贝母样品中总生物碱含量为0.236%。用高效液相色谱-蒸发光散射检测器法(HPLC-ELSD)对平贝母样品中主要的生物碱单体含量进行了测定,测定结果:平贝母样品中贝母素甲含量为0.0132%,贝母素乙含量为0.0181%。
2.平贝母中总生物碱提取技术的研究应用溶剂提取法和超临界二氧化碳萃取法提取平贝总碱,并将这两种方法进行了优化。
溶剂提取法先采用单因素试验,分析了乙醇浓度、提取时间、料液比和浸提时间对平贝总碱提取率的影响,然后采用均匀试验设计法优化了平贝总碱的提取工艺参数,确定出最佳提取方案为:乙醇浓度95%、提取时间6h、料液比1:9、浸泡时间1h,在此条件下平贝总碱提取率为87.12%。
超临界二氧化碳萃取法先采用单因素试验,确定了萃取压力、萃取温度、携带剂种类、携带剂用量和CO2流量等单项条件对平贝总碱提取率的影响,然后采用正交试验优化了平贝总碱的提取工艺参数,确定出最佳提取方案为:萃取压力20MPa,携带剂用量300mL,萃取时间2h,萃取温度45℃,CO2流量20kg/h,分离压力8MPa,分离温度40℃,在此条件下平贝总碱萃取率为92.14%。与溶剂提取法进行比较,超临界二氧化碳萃取平贝总碱的提取率是溶剂提取平贝总碱提取率的1.1倍。
3.平贝总碱体外抑菌试验的研究采用纸片扩散法考察了平贝总碱对几种常见呼吸道致病菌(金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、克雷伯氏肺炎杆菌、铜绿色假单胞杆菌)的体外抑菌作用,用琼脂平板稀释法测定了平贝总碱对这几种致病菌的最低抑菌浓度。试验结果表明:平贝总碱对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、克雷伯氏肺炎杆菌、铜绿色假单胞杆菌均有一定的抑菌作用。对克雷伯氏肺炎杆菌的最低抑菌浓度为2.5mg/mL;对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿色假单胞杆菌的最低抑菌浓度为5mg/mL。
4.平贝总碱分离纯化技术的研究采用硅胶干柱层析法对平贝总碱进行分离纯化,分离出贝母素甲和贝母素乙。固定相为薄层层析硅胶G,流动相为乙酸乙酯-甲醇-氨水(17:2:1)。用HPLC-ELSD法对分离出的贝母素甲和贝母素乙的纯度进行了测定。测定结果:贝母素甲纯度为93.19%、贝母素乙纯度为92.09%。