论文部分内容阅读
目的：氧化应激降低精液质量,是已知男性不育症的主要病因。本课题拟通过(1)观察氧化应激作用下Claudinll转录水平变化；(2)观察射线致睾丸氧化应激损伤后Claudin3、Claudinll表达量变化及其在生精功能恢复过程中与精子发生的关联性,以探讨氧化应激损伤睾丸精子发生中支持细胞紧密连接复合体功能变化；明确支持细胞紧密连接复合体于受损的睾丸生精功能恢复过程中所起的作用。方法：(1)48只雄性昆明小鼠随机分配至A、B、C、D4组,每组12只,A组空白对照,B、C及D三组分别以2Gy、6Gy及10Gy剂量60Co-Υ射线局部照射实验动物下腹部一次,于6周后处死,测定实验小鼠身体及双睾丸重量；HE染色观察睾丸组织学变化；酶联免疫法检测血清FSH水平；Real time PCR监测睾丸组织内Claudinll转录水平变化。(2)42只昆明雄性小鼠,随机分配为：空白对照A组,受2Gy、6Gy、10Gy60CoΥ射线单剂量射线下腹局部照射的B、C、D组,及受6Gy剂量照射后应用1、2及4μg/d剂量E2干预4周的E、F、G组。于照射后6周,收集睾丸,称重,行HE染色,计算各组睾丸曲细精管分化指数(TDI),应用RT-qPCR检测各组InhibinβB、Claudin3、Claudinll mRNA变化, Western Blot检测各组Claudinll蛋白表达。结果：(1)不同剂量射线致睾丸氧化应激损伤后睾丸重量下降(P<0.05),以C、D组更为明显(P<0.01)；与A组相比,受射线照射三组TDI下降明显(P<0.05),曲细精管直径减小,生精上皮排列紊乱；血清FSH上升,D组较A组升高1.9倍；伴随睾丸生精功能下降,组织内Claudinll转录水平呈现增高趋势,C、D组两组Claudinll mRNA水平高于正常对照之A组(P<0.05)。(2)随射线剂量增加,TDI呈减低趋势,与射线剂量呈负相关性(rs=-0.977,P<0.05)。D组InhibinβB mRNA水平显著低于A组(t=6.906,P<0.017),支持细胞合成InhibinβB能力下降；照射后C、D两组Claudin-3mRNA、Claudin-11mRNA及Claudin11蛋白增加(all P<0.017)。E2具改善射线损伤睾丸的生精功能作用,与C组相比,F、G两组睾丸重量及TDI均显著改善(all P<0.017)。在睾丸生精功能恢复过程中Claudin-3及Claudin-11表达量趋于正常,F组Claudin-11mRNA水平及蛋白表达水平与A组无差异(t=-2.497,P>0.013；t=-2.256,P>0.013)。Claudin-3、Clauindin-11表达与睾丸生精功能呈现负相关关系(rs=-0.884,P<0.05；rs=-0.758,P<0.05)。结论：射线致睾丸氧化应激压力下伴随着睾丸生精功能的损伤,血清FSH含量升高,支持细胞合成及分泌功能受损；睾丸组织内Claudin-11mRNA增加,支持细胞紧密连接复合体在氧化应激损伤睾丸过程中表达增多。通过升高E2,抑制ITT,降低睾丸内增多的Claudin-3、Claudin-11等支持细胞紧密连接复合体组分,睾丸受氧化应激损伤的生精功能表现出恢复状态。增多的支持细胞连接复合体阻碍睾丸内受氧化应激损伤的生精功能的恢复。