鳞翅目为昆虫纲中第二大目,仅次于鞘翅目,大部分为植食性昆虫且多数为农业害虫。目前化学防治仍然是这类害虫的主要防治方法,造成了严重的环境问题。对此类害虫的分子机理研究不够深入导致难以开发出其他对环境更友好的防治方法。在之前的研究中,本实验室基于杆状病毒苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒AcMNPV和Tet-On系统构建了可以用作研究鳞翅目昆虫分子机理的复制可控型AcMNPV载体,但存在背景表达过高的问题。为了降低四环素调控的Tet-On系统中的背景表达,本实验换用了背景表达更低,诱导表达量更高且对强力霉素(Dox)诱导更敏感的Tet-On 3G系统。利用Bac-to-Bac系统改造AcMNPV基因组,使其复制必需基因dnapol或lef3的表达受PTRE 3g诱导型启动子控制,同时插入增强型绿色荧光基因(EGFP)作为报告基因。将重组的AcMNPV基因组转染已构建的可稳定表达Tet on 3G的转基因细胞系,从而在细胞水平检测其作为复制可控型载体的可行性。为了避免背景表达的叠加,实验将系统中的必须部分——反式转录活化因子Tet on 3g的表达通过转基因的方法转移到了作为宿主的Sf9细胞中或粘虫体内,进一步避免了可能出现的背景表达加深现象。实验构建了多个不同的PiggyBac穿梭载体及两个转基因Sf9细胞系:Sf9(PIE1-Tet on 3G)和Sf9(opie2-Tet on 3g)。在RNA水平、蛋白水平及细胞水平检测了反式转录活化因子Tet on 3g在转基因细胞系中的表达,并且在细胞水平验证了复制可控型AcMNPV载体的可行性。同时实验尝试利用PiggyBac转座子系统显微注射粘虫胚胎获取转基因粘虫品系,摸索了显微注射胚胎的部分技术。稳定表达Tet on 3G的转基因Sf9细胞系的构建为复制可控型AcMNPV载体的验证及应用提供了平台,加快了对鳞翅目昆虫分子机理研究的进程,从而为开发出更合理的防治鳞翅目害虫的方法提供了基础理论,对农林业生产具有重要意义。