生物硫醇是生物体内一类与生物体的生理进程和病理过程密切相关的有机小分子。小分子荧光探针具有操作简单、响应迅速、生物适应性高、可成像立体监测等优点,是当今研究人员热衷的检测生物硫醇方法。由于三种生物硫醇结构相似,如何能够检测并区分三种生物硫醇是现在研究的热点。因此设计合成出一种能够从不同的发射波长和不同的激发波长来检测区分不同生物硫醇的小分子荧光探针是有挑战性和非常有意义的。本文设计并合成了一种新型的氮杂环香豆素类荧光探针BrPC,并通过核磁共振波谱对其结构表征,最终确定探针结构。我们选取含有氮杂环结构的香豆素荧光染料作为荧光发光基团,并在其3位和4位上引入4-溴苯硫醚键和醛基作为识别基团。探针BrPC可以从双激发波长双发射波长区分GSH和Cys/Hcy,并对其有极高的选择性,能与其他氨基酸区分。该探针与生物硫醇响应较快,荧光强度30 min内就可以达到峰值,反应动力学符合一级动力学,不同生物硫醇反应速率GSH＞Hcy＞Cys。该探针对GSH、Hcy、Cys的检测限分别为89 n M、92 n M、85 n M,检测限较低,该探针可以在p H=6～8下,区分GSH和Cys/Hcy。以上实验表明探针BrPC可以在体外进行生物硫醇的检测和区分。为了解决探针BrPC有背景荧光的问题,我们用苯硒醚键替换4-溴苯硫醚键,设计一种新型无背景荧光的氮杂环香豆素类荧光探针PSe C,并通过核磁和质谱表征和确定其结构。由于分子内的光致电子转移效应（PET）,探针PSe C基本没有背景荧光。该探针水溶性较好,可以在仅含1%DMSO的水溶液中与GSH和Hcy反应,反应后中断PET过程,探针可以发出荧光。该探针与GSH和Hcy反应后的荧光光谱说明其可通过红绿通道来区分两者,在激发波长为538 nm下定向识别GSH,在激发波长为402 nm下定向识别Hcy。该探针可以在30 min内识别GSH和Hcy,其反应动力学也符合一级动力学关系,不同生物硫醇反应速率GSH＞Hcy。该探针对GSH和Hcy的检测限分别为92 n M和360 n M,具有较低的检测限。该探针对生物硫醇具有很高的选择性,同时可以应对其他测定物质的干扰。该探针在p H=6～8下可以区分GSH和Hcy。鉴于该探针水溶性较好,对生物硫醇响应较快,可以适应复杂的环境,且细胞兼容性好,将其成功应用于活细胞的内源性和外源性Hcy和GSH的双通道识别、区分与成像。