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目的：
应用microRNAs（miRNAs）芯片筛选早孕小鼠胚胎着床前后子宫内膜差异表达miRNAs，进行实时荧光定量PCR验证，运用靶基因预测数据库预测差异表达miRNAs调控的靶基因，为研究其在早孕小鼠胚胎着床过程中的作用打下基础；通过数据库的筛选，对靶基因指向与胚胎着床子宫内膜增殖相关的miR-106b在早孕小鼠胚胎着床前后子宫内膜表达规律进行研究，为研究miR-106b在胚胎着床过程中对子宫内膜的作用机制打下基础。
方法：
1.样本的准备：分别收集孕4天和孕6天的小鼠子宫内膜组织。
2.miRNAs芯片分析：提取小鼠子宫内膜组织的总RNA，总RNA用miRCURYTM LNA Array labeling kit（Exiqon，Denmark）使用Cy3按照说明书标记。Cy3标记的RNA用miRCURYTM LNA Arrays（Exiqon，Denmark）进行杂交。通过Gene Pix4000B扫描仪和Gene Pix6.0软件（Axon Instruments，Union City，CA）进行图像扫描和数据分析。
3.荧光定量PCR检测部分差异表达miRNAs：根据miRNA成熟序列设计特异性的反转录引物进行反转录，设计miRNAPCR.上下游引物进行实时荧光定量PCR，采用U6作为内参，进行归一化。
4.生物信息学分析：应用目前常用miRNAs靶基因预测网站Targetscan、Pictar、miRBase来检索差异表达miRNAs的预测靶基因。
5.原位杂交：原位杂交检测miR-106b在胚胎着床前后子宫内膜的表达量和表达部位。
结果：
1.miRNAs芯片结果显示：孕6天比孕4天上调2倍及以上的miRNAs有17个；下调2倍及以上miRNAs有18个。实时荧光定量PCR结果显示芯片数据可靠。通过Targetscan、Pictar、miRBase等数据库筛查，初步获得差异表达的部分miRNAs多指向与增殖、凋亡和抗凋亡相关的靶基因。
2.miRNAs芯片、实时荧光定量PCR和原位杂交显示：miR-106b在孕4天的表达高于孕6天2倍以上，且主要表达在小鼠子宫内膜基质细胞，在腔上皮细胞和腺上皮细胞没有表达。提示miR-106b可能通过调控其靶基因而调控早期妊娠子宫内膜基质细胞的生长、增殖、分化和凋亡。
结论：
1.本研究结果显示孕6天与孕4天相比，存在差异表达的miRNAs，提示miRNAs可能在胚胎着床前后子宫内膜中起重要的调控作用。
2.利用实时荧光定量PCR.进一步验证了部分差异表达的miRNAs，对这些miRNAs在孕6天和孕4天子宫内膜组织的表达量进行定量检测，验证了miRNAs芯片结果的可靠性。
3.利用生物信息学方法，预测差异表达的miRNAs的靶基因，推测这些miRNAs可能通过调节增殖、凋亡和抗凋亡相关的靶基因来调控胚胎着床。
4.实时荧光定量PCR检测miR-106b在胚胎着床前后子宫内膜存在差异表达，提示其可能通过调控相关靶基因进而调控胚胎着床。原位杂交检测miR-106b主要表达在小鼠子宫内膜基质细胞，根据数据库和相关文献分析，提示miR-106b可能通过调控.Npml、Tsg101和PTEN等靶基因的表达，进而调控早期妊娠子宫内膜基质细胞的生长、增殖、分化和凋亡，最终调控胚胎着床过程。