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MiRNA是一类由19~25个核苷酸组成的非编码小分子RNA,通过与靶mRNA上miRNA识别元件完全或部分互补的结合,使mRNA降解或者抑制其翻译,进而调控一系列重要生命进程。miRNA不仅可以在细胞内发挥基因表达调控作用,而且可以通过细胞外泌的方式影响微环境其他细胞的生物学活性。然而,在乳腺肿瘤微环境中,异质性的乳腺癌细胞是否可以通过细胞外泌miRNA的形式调控其他乳腺癌细胞的生物学活性尚未见报道。目的:探讨稳定过表达miR-200c、miR-205细胞外泌miR-200c、miR-205对细胞BT549迁移与侵袭的影响。方法:1、高通量miRNA表达谱数据筛选乳腺癌转移相关miRNA:在GEO数据库中筛选与乳腺癌转移相关的miRNA表达谱芯片数据,使用GEO 2R进行数据分析,获得转移能力不同的乳腺癌细胞差异表达的miRNA;筛选miRNA作为实验研究目标。2、miR-200c、miR-205对BT549细胞迁移、侵袭能力的影响:用包装hsa-mir-200c和hsa-mir-205的慢病毒感染乳腺癌细胞BT549;嘌呤霉素(PM)对感染后的细胞进行阳性克隆筛选,获得稳定过表达miR-200c的乳腺癌细胞株BT549(BT549 miR-200c)以及稳定过表达miR-205的乳腺癌细胞株BT549(BT549 miR-205)。qRT-PCR实验检测稳定过表达miR-200c、miR-205细胞株中相应的miRNA表达水平;Transwell迁移实验检测细胞的迁移能力,Transwell侵袭实验检测细胞的侵袭能力。3、细胞外泌miR-200c、miR-205对BT549细胞迁移、侵袭能力的影响:分别取过表达miR-200c、miR-205乳腺癌细胞培养液与常规细胞培养液按1:1混匀,即时培养BT549细胞96 h;通过qRT-PCR检测BT549细胞miR-200c、miR-205的表达水平;采用Transwell迁移和侵袭实验检测外泌miR-200c、miR-205对BT549细胞迁移与侵袭能力的影响。结果:1、在GEO数据库中搜索到GSE62022和GSE40056数据集,利用GEO 2R对其进行miRNA差异表达分析,获得乳腺癌转移相关差异表达miRNA;PROGmiR、BreastMark数据库显示miR-200c、miR-205高表达的乳腺癌患者具有更高的生存率。2、嘌呤霉素筛选的hsa-mir-200c和hsa-mir-205慢病毒感染BT549细胞呈现绿色荧光;qRT-PCR检测结果显示,相对BT549 control,BT549 miR-200c、BT549miR-205细胞株内miR-200c、miR-205表达水平增高(P<0.05);Transwell迁移实验表明BT549 miR-200c、BT549 miR-205细胞株的迁移能力降低;Transwell侵袭实验表明BT549 miR-200c、BT549 miR-205细胞株的侵袭能力降低。3、qRT-PCR显示稳定过表达miR-200c、miR-205的乳腺癌细胞外泌miR-200c、miR-205(P<0.05)含量升高;Transwell迁移和侵袭实验表明,相对于control组,BT549 miR-200c、BT549 miR-205细胞株培养液培养的BT549细胞迁移和侵袭能力均下降(P<0.05)。结论:1、成功构建稳定过表达miR-200c、miR-205乳腺癌细胞BT549,miR-200c、miR-205均能抑制乳腺癌细胞BT549的体外迁移与侵袭能力。2、稳定过表达miR-200c、miR-205乳腺癌细胞BT549的外泌miR-200c、miR-205含量增高。3、外泌miR-200c、miR-205均能抑制乳腺癌细胞BT549的体外迁移和侵袭能力。