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细胞周期是一个精密的过程,受到多种物质的调控,E2F/DP是其一个重要的功能复合体。DP是E2F的伴侣蛋白,使E2F异源二聚化,并协助其定位到细胞核,使基因转录或抑制。 植物E2F/DP家族基因转录的总体水平较低,但是该家族基因在某些特异的组织中表达丰沛,如增生器官和生长旺盛的组织等。基因芯片分析发现该家族可能还参与植物生命过程的营养调控。 本研究根据SNG数据库获得DNA序列信息克隆了番茄SlDP1基因,开放阅读框为906 bp,可编码301个氨基酸。采用生物信息学的方法分析该基因及编码蛋白的分子特征;通过荧光定量PCR研究该基因的表达模式;研究SlDP1基因对激素、盐胁迫及伤害的应答特征;构建了沉默载体并对番茄进行遗传转化,检测该基因在番茄叶片的沉默效果。本研究得到的主要结论如下: ①根据SNG数据库登录信息(SGN-U567182),设计引物克隆该基因的开放阅读框和部分C-末端序列,大小为1094 bp,命名为SlDP1; ②生物信息学分析,SlDP1基因定位于细胞核,具有保守的DNA结合域、二聚化区域和C-末端及多个磷酸化位点。二级结构预测SlDP1蛋白含51.50%的环状结构,34.55%的α螺旋和2.66%的β折叠。通过编码蛋白序列比对,显示该基因与葡萄等同源性高达70%~80%,同源区域主要集中在 DNA结合域、二聚化区域和C-末端部分区域; ③表达模式分析发现 SlDP1基因在野生型番茄根、花及萼片以及果实成熟时期B、B+4及B+7时期表达量较高,并且在果实的发育成熟过程中其表达量有一个明显的上升趋势; ④外源激素处理番茄植株发现,ACC和IAA处理的植株SlDP1基因表达量提高; ⑤盐处理的叶片 SlDP1基因表达量下降,伤害处理的叶片该基因表达量显著下降; ⑥成功构建了 pBIN19:SlDP1沉默载体,用接合转移的方法转化农杆菌LBA4404,通过番茄外植体侵染,Kan筛选获得转基因番茄苗。NPTII检测,将转基因苗命名为1-5五个株系;荧光定量PCR检测,叶片中SlDP1基因的沉默效果为约88%。