流式细胞术检测血小板微颗粒方法学探讨

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【目的】应用流式细胞术(FCM)-富含血小板血浆(PRP)法检测血小板微颗粒(PMPs),并进行方法学、影响因素探讨及临床意义的评价。【方法】采用PRP,应用血小板特异性荧光抗体CD61-FITC标记血小板,并以0.82μm标准微球进行定位对照和设置机器检测条件,调节机器阈值,设门计数PMPs占CD61阳性颗粒的百分比。以ADP及胶原诱导血小板活化,计数活化以后血小板释放的PMPs,作为阳性对照,评价该方法的可行性,同时探讨了不同抗凝剂抗凝PRP,不同保存时间等对PMPs检测的影响。【结果】检测30例健康对照者静息状态下血小板释放的PMPs为2.19%±0.48%,血小板活化后释放的PMPs数量显著增加; ADP活化以后血小板产生的PMPs为5.43%±3.48%,胶原活化以后血小板释放的PMPs为3.46%±1.14%,提示静息状态和激活后PMPs差异有显著意义(P<0.01)。应用109mmol/L枸橼酸钠和CTAD(枸橼酸钠0.11mol/L,茶碱15mmol/L,ERI AAF 3.7mmol/L,潘生丁0.198mmol/L)抗凝样本,检测结果显示CTAD抗凝PRP静息状态下血小板释放PMPs的量显著低于枸橼酸钠抗凝PRP释放PMPs量。另外标本存放时间对PMPs检测有较大影响。37例血栓性疾病患者检测结果提示血小板释放的PMPs的量均显著高于正常对照组(P<0.01)。【结论】采用流式细胞术富含血小板血浆法检测PMPs方法可行,并且其操作简单、影响因素相对较少,比较适合临床常规检测。同时PMPs的检测是检测血小板活化的一个重要指标,而血小板活化对于早期诊断血栓性及出血性疾病具有重要意义。
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