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为了研究鹅α干扰素(goIFN-α)的免疫佐剂效应,构建了真核表达质粒(pcDNA-goIFN-α),在COS-7细胞中表达后,检测其对GPV VP3基因疫苗的佐剂作用,将鹅α干扰素真核表达质粒(pcDNA-goOFN-α)以每只50、100、200μg三个剂量与GPV VP3基因疫苗一起用肌肉注射法分别免疫28日龄鹅,同时设分子佐剂gIL2对照组、分子佐剂goIFN-α与gIL2联合免疫佐剂组、pcDNA3.1(+)对照组、生理盐水阴性对照组及小鹅瘟弱毒疫苗对照组,从接种后第3、7、14、21、28、35、49d开始采抗凝血借助淋巴细胞增殖的试验(MTT法)来检测鹅的外周血T淋巴细胞转化水平;从第3、7、14、21、28、35、49、63、77 d开始采凝血运用间接ELISA法来确定鹅的血清抗体水平。获得如下结果:
1.鹅IFN-α的表达检测重组质粒能够在COS-7细胞内有效表达,在转染6h后就能检测出目的蛋白,蛋白表达量快速增加,在36h后,速度变缓。
2.淋巴细胞对Con A的反应能力(OD值)pcDNA-goIFN-α以不同剂量与GPVVP3基因疫苗一起免疫鹅后,各实验组的T淋巴细胞增殖反应在免疫后的第3d处于同一水平,从第3d到第28d开始稳步上升,并在28d达到了最高峰,而基因疫苗pcDNA-VP3组在第35d达到高峰。在第28d,佐剂组的OD值均极显著(P≤0.01)高于pcDNA-VP3基因疫苗组、GPV弱毒组、pcDNA3.1(+)和生理盐水对照组。goIFN-α佐剂组只在第21、35和49d显著(P≤0.05)高于gIL2佐剂组,其他时间点差异不显著。联合佐剂组在第28和35d均显著高于goIFN-α或gIL2佐剂组(P≤0.05)。
3.外周血抗体IgG水平(OD值)佐剂免疫组的ELISA抗体水平从免疫后的第3d起,其增长趋势为先慢后快,至第35d到达最大值,之后逐渐降低,但仍明显高于pcDNA-VP3基因疫苗组和GPV弱毒组。gIL2佐剂组在第28、49和77d显著高于goIFN-α佐剂免疫组(P＜0.05),goIFN-a和gIL2联合佐剂免疫组在第29d到第50d极显著高于goIFN-α或gIL2单独佐剂免疫组(P≤0.01)。在goIFN-α佐剂组中,随佐剂剂量的不同呈现一定的剂量相关性。
综上所述,goIFN-α能够在COS-7细胞中表达,pcDNA-goIFN-α能使GPV VP3基因疫苗诱导的T淋巴细胞转化能力增强,外周血清抗体的IgG水平升高,可以看出其是一种良好的能够增强GPV VP3基因疫苗效果的分子佐剂,分子佐剂goIFN-α和goIL2联合免疫组效果最佳,pcDNA-goIFN-α肌肉注射200μg/只的效果次之。