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蛋白质是生命最重要的物质基础之一,其定量测量是化学、生物化学、医学等研究领域的重要课题。近年来荧光探针染料与蛋白质结合后的荧光特性、动力学特征和电化学特征等受到关注,并以此为基础建立分析方法。荧光探针技术最大的特点是具有高度的灵敏性和极宽的动态响应范围,进一步建立高灵敏度、低检测限的荧光探针定量测定蛋白质的方法具有重要意义。
本论文主要包括以下两个方面的内容:
1 概述蛋白质的化学基础,综述了蛋白质定量分析的一些主要方法及其在生物化学、药学、食品和临床医学等方面的应用,引用文献112篇;
2 寻找探索新的性能优良的荧光探针(1)荧光染料探针:研究发现,荧光桃红B在pH=2.8的Britton-Robinson缓冲介质中能与血清蛋白形成复合物,蛋白质可使荧光桃红B的荧光强度减弱,并且其减弱程度对人血清白蛋白(HSA)的线性范围是0.02-0.24 mg/L,检测限为8.3μg/L,对0.1mg/L的HSA的11次平行测定的标准偏差为2.3%,回收率为92.6%-96.2%,说明本方法准确可靠。
(2)二聚体荧光染料探针:研究发现,中性介质中钙黄绿素在表面活性剂CTMAB的作用下形成二聚体,体系荧光强度减弱,而加入蛋白质后体系荧光强度增强,且增强程度与体系中的蛋白质的量呈线性关系,此方法对HSA的线性范围为0.4~8 mg/L,检出限为34μg/L,对牛血清白蛋白(BSA)的线性范围为0.8~10 mg/L,检出限为32μg/L,对卵蛋白(Alb)的线性范围为1~16 mg/L,检出限为47μg/L;碱性介质中,水溶性荧光素(SF)二聚体可作为测定人血清总蛋白的荧光探针,方法的线性范围为0.3~6mg/L,检出限为69μ/L,对3 mg/L的HSA的11次平行测定的标准偏差为0.96%。中性介质中,水杨基荧光酮二聚体可作为测定人血清总蛋白,方法的线性范围为0.8~12mg/L,检出限为80μg/L,对含量为2 mg/LHSA的11次测定的相对标准偏差为1.1%。将以上方法直接应用于人血清的测定,与经典的考马斯亮蓝法测定的结果相吻合,结果令人满意。
3 深入开展蛋白质与染料探针相互作用机理研究研究了染料与蛋白质以及染料、表面活性剂和蛋白质的荧光光谱和紫外光谱,对其反应机理进行深入的研究。深入开展蛋白质与燃料探针的相互作用的理论研究不仅对于改进蛋白质分析方法有实际意义,而且有助于阐明生物大分子与小分子配体相互作用的化学本质。因而在生命科学中有重要意义。