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囊素三肽（BS）作为法氏囊中第一个化学结构明确的生物活性分子,不仅对禽类具有免疫调节作用,而对哺乳动物及人类淋巴细胞也具有明显的免疫学及生理学功能。天然囊素和人工合成囊素在体外均可诱导禽和哺乳动物的前体B淋巴细胞表型分化。囊素三肽具有独特组成结构,其氨基酸序列为：Lys:His:Gly:NH2,其中Lys:His:Gly:NH2为1:0.9:1:0.8。赵明军等利用噬菌体展示技术筛选与Bs单克隆抗体特异性结合肽,发现“TXNL"样肽是与BS单克隆抗体特异性结合的保守序列。竞争ELISA表明,该“TXNL"样肽在一定程度上可以竞争性抑制BS与BS单克隆抗体的结合。生物学活性试验表明"TXNL"样肽与BS也具有类似的生物学活性。王臣等基于囊素分子和"TXNL"样肽设计的囊素模拟肽"T-X-N-L-K-H-G"（?）显著增强JEV亚单位疫苗和禽流感H9N2灭活疫苗免疫小鼠的免疫反应。胸腺肽al （thymosin a1, Tal）又称为胸腺素α1,是由28个高度保守氨基酸组成的酸性多肽。体内外实验表明Tα1对细胞因子的分泌、淋巴细胞功能等都有影响,被认为是具有良好疗效的生物反应调节物（BRM）。Tα1作为一种免疫增强剂,其可以调节免疫系统的诸多环节,其中包括影响T细胞的成熟,分化和功能,增加巨噬细胞的抗原递呈和肿瘤杀伤作用,增强NK细胞活性,增加细胞因子分泌,强化免疫抑制和自身免疫疾病机体的免疫恢复,促进DC细胞的分化、成熟并提高抗原递呈能力和减少免疫介导的炎症反应。由于其在免疫调节方面的出色发挥,韩国在2000年已经有将胸腺素α1做佐剂的流感疫苗问世。由于囊素模拟肽和胸腺肽α1均表现出免疫佐剂活性,我们设计了串联肽囊素模拟肽与Tα1(Thymosin al-bursin like fusion peptide, Tα1-BLP),并且做为佐剂检测其对H9N2禽流感灭活病毒的免疫效果的影响。为其进一步的临床应用提供理论数据。1. Thymosin α1-BLP的基因设计及大肠杆菌中的表达按照大肠杆菌偏嗜密码子通过SOE-PCR方法合成Ta-BLP基因,155bp的基因,上下游分别带有EcoRI和XhoI双酶切位点。经测序证明正确后,克隆至表达载体pET32a中,重组表达载体在大肠杆菌BL21中诱导表达,经SDS-PAGE电泳证实,融合蛋白主要以可溶形式存在,大小为31.4KD,融合蛋白经Ni-NTA亲和柱纯化,得到融合蛋白表达产物,并为进一步研究其在动物体内的免疫增强效果奠定了基础。2. Thymosin αl-BLP作为禽流感H9N2灭活疫苗免疫佐剂对小鼠免疫效果的研究佐剂在开发高效,合适的疫苗中发挥着重要作用。由于囊素样肽（bursin-like peptide, BLP）与胸腺肽α1(Thymosin al, Tα1)均表现出佐剂活性,串联肽Thymosin al-bursin like peptide (Tα1-BLP)被表达,纯化。为了检测串联肽Tα1-BLP是否有免疫佐剂作用,H9N2禽流感WIV与不同浓度的TRX-BLP或TRX-Tα1-BLP昆合免疫小鼠。通过血凝抑制试验,IgG抗体水平,IgG抗体亚型,脾淋巴细胞增值试验,IFN-γ和IL-4细胞因子检测免疫后测免疫效果,为了评估免疫后小鼠肺部清除病毒的效果,攻毒后通过Real time PCR方法检测了肺部病毒滴度。结果显示,串联肽作为佐剂可以有效地提高禽流感的抗体滴度和血凝抑制抗体滴度,尤其在首免和第一次加强免疫之后。添加Tα1-BLP后可以将WIV引起的Th1型免疫反应为主转向Th1/Th2混合型。应用Tα1-BLP有助于肺部禽流感病毒的清除。但是串联肽Tα1-BLP也表现出存在剂量依赖关系。