柑橘黄龙病（Citrus Huanglongbing,HLB）严重阻碍了全球柑橘产业的发展,由于其病原菌离体培养难度较大,导致了黄龙病致病机理的研究进展缓慢。目前,尚未有针对性的防治方法。在前期工作中,本实验室筛选出了对黄龙病的防控具有一定效果的5号菌剂,本课题就5号菌剂对黄龙病的防控效果及其作用机制进行了进一步验证,并对5号菌剂进行了分离纯化,发现其中包含两个菌株。此外,本研究还对柑橘植物响应黄龙病免疫应答过程中有重要调控作用的蛋白RIN4和RIN4-like进行了原核表达和纯化。具体的研究成果如下:1.5号菌剂对减轻柑橘黄龙病症状的效果。本实验发现沙糖桔经5号菌剂处理23次后,叶片经qPCR和PCR综合检测,阳性率由100%下降到25%,感病南丰蜜桔经15次处理后,对叶片和枝皮同时进行qPCR和PCR检测,其综合阳性率也由100%下降至53.33%,结果表明5号菌剂对抑制植株病原浓度有一定效果。针对抗病机制研究我们发现经5号菌剂处理后在较短时间内可以有效激活植株体内SOD、POD、CAT、TrxR等抗病相关的酶类的产生。此外,对感病植株的各项生理指标进行测定发现,5号菌剂可以有效提高感病植株的叶绿素含量和光合作用效率,并且降低感病柑橘叶片中淀粉、可溶性糖和胼胝质的积累。进一步对柑橘根系生长影响的探究发现,5号菌剂处理可以促进柑橘植株根系生长,减轻由黄龙病引起的根系腐烂的现象,对处理组无明显病症的根系和明显病变根系进行解剖学观察发现,处理组无病症的根系薄壁细胞中出现了较多的淀粉颗粒,这可能与植株韧皮部运输功能得到了疏通有关。2.5号菌剂分离鉴定结果。对5号菌剂进行了分离纯化得到了 5-1和5-2两株芽孢杆菌,通过形态学观察和16SrDNA基因片段的鉴定我们发现菌株5-1与贝莱斯芽孢杆菌的相似度较高,而菌株5-2则与解淀粉芽孢杆菌较为相似,进化树结果也表明菌株5-1与贝莱斯芽孢杆菌同源的置信度达98%,菌株5-2与解淀粉芽孢杆菌同源的置信度达到了 95%。3.RIN4和RIN4-like蛋白的原核表达和纯化。根据数据库中甜橙RIN4（XM006479189.3）和RIN4-like（XM006493010.3）基因序列设计了两对特异性引物RIN4-/-和R4L+/-,并克隆得到了两个目的片段。随后利用pET28a-sumo质粒构建两个目标蛋白的表达载体,通过比较在不同表达系统中的表达效率,发现E.coli Rosetta Ⅱ表达系统更适合RIN4和RIN4-like的异源表达,对成功表达的His-sumo-RIN4和His-sumo-RIN4-like两个融合蛋白进行镍柱纯化和分子排阻色谱分析,推测两个融合蛋白在体外都更容易以多聚体形式存在。