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背景:胰腺癌是高侵袭性的消化系统恶性肿瘤之一,国内外公布的统计数据均显示,胰腺癌的发病率及死亡率逐年攀升。由于对传统化疗药物的高度耐受及靶向药物的缺乏,目前该肿瘤唯一有效的治疗手段为根治性切除术,但大部分患者就诊时已属晚期,仅有20%的患者有机会行根治性手术治疗。因此,探索新的胰腺癌诊断方法及治疗策略迫在眉睫。PEG10是父系表达印记基因家族的重要成员之一,在多种细胞功能中发挥重要的作用,包括细胞的增殖、凋亡、周期调控等。与其他父系表达印记基因相似,PEG10表达水平的异常参与某些肿瘤的恶性进程。而TCGA数据库公布的大样本胰腺癌mRNA测序结果显示,PEG10在胰腺癌中存在普遍的表达。该结果提示,PEG10可能参与胰腺癌的恶性发展,其在胰腺癌发展中扮演的角色值得深入探讨。目的:1、研究胰腺癌样本中PEG10蛋白表达水平,并分析其与胰腺癌临床病理因素、预后的相关性。2、研究胰腺癌细胞株中PEG10表达水平,探索PEG10对胰腺癌细胞增殖、侵袭、迁移等功能的影响,并探索其中潜在的调节机制。3、探索PEG10促胰腺癌进展的上游调节机制,并分析样本中PEG10与上游调控因素的相关性。4、研究胰腺癌患者血浆PEG10的浓度,并分析其诊断价值。方法:1、通过免疫组化研究胰腺癌样本中PEG10表达水平;并通过卡方分析、相关性分析分析其表达与临床病理因素的相关性;通过Kaplan-Meier模型、COX回归模型分析其表达与不良预后的相关性。2、通过Westerm Blot及荧光定量PCR检测胰腺癌细胞株中PEG10的表达;并通过小干扰RNA及过表达质粒分别构建PEG10干扰及过表达细胞株;通过EDU、克隆形成、CCK-8、裸鼠皮下成瘤等实验验证PEG10对胰腺癌细胞增殖的影响;通过Transwell实验验证PEG10对胰腺癌细胞侵袭、迁移的影响。3、在干扰及过表达PEG10细胞株的基础上,通过流式凋亡检测、流式周期检测、Western Blot等实验探索PEG10促进胰腺癌细胞增殖的机制;通过Westerm Blot、荧光定量PCR等实验探索PEG10促进胰腺癌细胞侵袭、迁移的机制。4、通过ChIP、EMSA、双荧光素酶报告基因实验验证PEG10上游调节机制,并通过免疫组化、相关性分析进一步分析样本中PEG10与上游分子的相关性。5、通过Elisa实验检测胰腺癌患者、健康志愿者血浆中PEG10的浓度;通过ROC曲线确定诊断临界值,并及进一步分析血浆PEG10的诊断价值。结果:常的高表达,且PEG10的高表达与胰腺癌血管侵袭、Ki-67表达明显相关;PEG101、胰腺癌样本中PEG10异的高表达与胰腺癌患者不良预后相关,是不良预后的独立危险因素。2、胰腺癌细胞中PEG10干扰、过表达能分别抑制、促进胰腺癌细胞的增殖、侵袭、迁移能力。3、干扰PEG10能上调p21及p27表达以阻滞G0/G1期,并进一步抑制胰腺癌细胞增殖;干扰PEG10能抑制ERK1/2-MMP7通路,并进一步抑制胰腺癌细胞的侵袭、迁移。过表达PEG10则表现出相反的趋势。4、E2F-1能够与PEG10的启动子区域结合,直接正调控PEG10的表达。胰腺癌样本中E2F-1的表达与PEG10的表达存在明显的正相关。5、胰腺癌患者血浆中术前PEG10浓度明显升高,且术后第7天明显下降。PEG10的浓度在各期胰腺癌患者中均升高,且转移性胰腺癌患者血浆中PEG10的浓度明显高于非转移性胰腺癌患者。结论:1、胰腺癌样本中PEG10异常高表达,且与胰腺癌的进展、不良预后密切相关。2、PEG10能够通过加速G0/G1期促进胰腺癌细胞增殖;通过增强ERK1/2-MMP7通路促进胰腺癌细胞侵袭、迁移。3、PEG10受转录因子E2F-1的直接调控。4、血浆PEG10可用于胰腺癌的诊断,包括早期诊断。