论文部分内容阅读
NF-κB是一类关键性的核转录因子,一般在各种细胞中都有且以非活化的同源二聚体或异源二聚体的形式存在于胞质中,具有十分重要的功能。众所周知,NF-κB是多种信号途径中的重要的一环,拥有许多的生物学活性,与许多各种生理的以及病理的过程有关,比如炎症、肿瘤等,参与以及调控细胞增殖和细胞凋亡等的相关过程。由此可知,通过抑制NF-κB为核心的信号转导途径,可能为防治某些疾病开辟新途径。二氢丹参酮Ⅰ是从唇形科植物丹参中提取出来的一种天然产物,红色针状结晶,具有抗菌、抗炎、抗肿瘤活性。本次研究主要利用Hela细胞给予不同浓度的二氢丹参酮Ⅰ检测其对NF-κB活化的影响,以及检测了其对细胞凋亡的影响;其次是利用裸鼠移植瘤实验来检测二氢丹参酮Ⅰ对肿瘤增殖的影响。其中,噻唑蓝比色分析法(MTT)主要检测药物对Hela细胞的毒性大小;利用荧光素酶报告基因实验检测药物对NF-κB转录活性的影响;蛋白免疫印迹实验则在蛋白水平上检测了药物对NF-κB蛋白表达及其靶蛋白表达的影响;通过RT-PCR实验在RNA水平上检测药物对IL-6/TNF-/VEGF mRNA表达的影响;免疫荧光试验主要检测药物对p65核移位的影响;通过流式细胞术检测药物对Hela细胞凋亡率的影响;体内试验中,通过建立裸鼠移植瘤模型检测药物对肿瘤增殖的影响。荧光素酶报告基因及MTT实验证明,二氢丹参酮Ⅰ可抑制NF-κB的活化且没有明显的细胞毒性。通过蛋白免疫印迹实验得出二氢丹参酮Ⅰ可剂量性的抑制κBα的磷酸化和降解,抑制p65的磷酸化和核转移,还可以抑制TNF-α诱导的NF-κB靶基因的表达。免疫荧光试验进一步证明,二氢丹参酮Ⅰ可抑制p65的核移位。RT-PCR实验表明,二氢丹参酮Ⅰ可剂量性的抑制IL-6/TNF-a/VEGF mRNA的表达。此外,通过流式细胞术得出二氢丹参酮Ⅰ能促进TNF-α诱导的Hela细胞的凋亡。体内实验证明,在裸鼠移植瘤模型中,二氢丹参酮Ⅰ可抑制肿瘤细胞的增殖。综上所述,二氢丹参酮Ⅰ可以作为改善NF-κB依赖的病理学环境的候选药物。