长链非编码RNA AK124742在人卵丘细胞中的表达及临床意义

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背景及目的为了防止多胎妊娠的发生风险,单胚胎移植(Single-embryo transfers,SETs)已经愈来愈广泛应用于辅助生殖技术,SETs成功的关键在于如何正确选择最具发育潜能的胚胎移植并成功建立妊娠。而卵母细胞质量是决定胚胎“命运”的前提。迄今为止,在临床上无创的主观形态学评分仍作为主要的选择标准运用于移植胚胎的选择,但是,主观形态学选择标准并不能客观正确地反映胚胎的发育潜能。人卵丘细胞和卵母细胞之间存在密切的关系,通过对人卵丘细胞基因表达谱的分析能够为胚胎选择提供更为精确、客观、无创的办法。基因组计划的顺利完成和蛋白质组学及转录组学的蓬勃发展促进了RNA组学研究的日趋成熟,非编码RNA(non-coding RNA,ncRNA)是人类基因组的组分之一,其在生命活动中所发挥的重要作用已经开始受到广泛的重视和认可。长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是一类转录本的长度大于200nt且不编码任何蛋白质的RNA分子。LncRNA主要通过表观遗传修饰、转录及转录后等多个层面来调控基因的表达水平。国外有文献报道了人卵丘细胞中lncRNA表达可能参与调控卵母成熟、受精及胚胎的发育。在我们先前的研究中发现一个新的lncRNA AK124742,该lncRNA是PSMD6的天然反义转录RNA。但其目前在卵母细胞及胚胎发育过程中的作用还不清楚,因此需要进一步的研究。本研究探讨体外受精周期患者卵丘细胞中lncRNA AK124742和mRNA PSMD6的表达水平,分析基因表达之间的相关性,明确它们在卵母细胞成熟以及胚胎发育中的作用。判断其对体外受精-胚胎移植结局的预测价值。方法收集40例首次来安徽医科大学第一附属医院生殖医学中心接受IVF治疗患者的卵丘细胞,根据40例患者的CCs围绕的卵母细胞受精后胚胎发育情况将CCs分成两组,优质胚胎组(A组)和低质量胚胎组(B组),使用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(real-time quantitative reverse transcriptase-polymerase chain reaction,qRT-PCR)技术检测两组CCs中lncRNA AK124742和mRNA PSMD6的表达水平。基因表达的相关性分析采用Pearson法。采用受试者工作特征曲线评价AK124742和PSMD6相对表达量对临床妊娠结局的预测价值。结果A组卵丘细胞中lncRNA AK124742和mRNA PSMD6表达水平较B组卵丘细胞均明显增高(P<0.01),A组卵丘细胞中的lncRNA AK124742和mRNA PSMD6相对表达量较B组卵丘细胞分别平均增高了约2.85倍和3.05倍。进一步分析发现lncRNA AK124742和mRNA PSMD6在人卵丘细胞中的表达呈正相关关系(R2=0.606,P<0.01)。妊娠组lncRNA AK124742和mRNA PSMD6相对表达量均较未妊娠组增高,差异有统计学意义(P<0.01)。LncRNA AK124742相对表达量预测妊娠结局的ROC曲线下面积为0.78(95%CI:0.64–0.93),此指标具有85.7%的灵敏度和68.4%的特异性;mRNA PSMD6相对表达量预测妊娠结局的ROC曲线下面积是0.88(95%CI:0.78–0.98),此指标具有71.4%的灵敏度和94.7%的特异性。结论AK124742和PSMD6在IVF患者A组卵丘细胞中的表达水平较B组卵丘细胞明显升高,差异有统计学意义,可能影响卵母细胞成熟及胚胎的发育;lncRNA AK124742和PSMD6两者在IVF患者卵丘细胞中的表达呈现正相关性,表明前者可能是通过正反馈调节实现对后者的作用,具体机制的阐释需要进一步的研究;另外,人CCs中lncRNA AK124742和PSMD6的相对表达量可以作为潜在的预测妊娠结局的分子指标。
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