β-环糊精树枝分子的合成及免疫佐剂效果分析

来源 :大连理工大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:cherry_20050901
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疫苗对传染病、烈性疾病的治疗和预防具有重要意义。新型亚单位疫苗,不含有病毒的基因组,较减毒活疫苗安全,但免疫原性很弱,需要在使用时加入一定量的疫苗佐剂,来提高免疫效果。因此本论文合成了基于β-环糊精的树枝状大分子,研究其作为佐剂的免疫学性质和安全性。首先β-环糊精(β-CD)和甲基丙烯酸酐(MA)反应,合成甲基丙烯酸酐酰化的β-环糊精(β-CDMA),产率为70%;其次甲基丙烯酸酐和甲基丙烯酸羟乙酯反应,合成单体乙二醇二甲基丙烯酸酯,产率为71%;以β-CDMA为树枝状大分子的核,通过点击化学和迈克尔加成反应,使乙二醇二甲基丙烯酸酯单体与半胱胺交替反应,合成G1、G2、G3代树枝状大分子,产率分别为84%、80%、90%。1H NMR结果表明产物结构正确;凝胶渗透色谱结果表明β-CDMA的聚合物分散性指数(polymer dispersity index,简称PDI)值为1.1,接近单分布,纯度较高。对于G1、G2、G3代树枝状大分子,随着树枝状大分子代数的增加,分子量增加,且PDI值均小于1.1,表明合成的树枝状大分子接近单分布,纯度较高。以常规铝佐剂为对照,考察不同剂量的G3树枝状大分子对风疹亚单位疫苗体液免疫应答和细胞免疫应答的增强效果。间接ELISA实验结果表明,随着G3树枝状大分子剂量的增加,抗血清滴度增加;对同一剂量,不同血清稀释度下G3树枝状大分子组和铝佐剂组的OD值进行比较,其中当佐剂的使用剂量为100μg,血清稀释度为1:160,1:320时,G3树枝状大分子组的OD值比铝佐剂组的OD值高,差异极显著。因此表明G3树枝状大分子作为佐剂可以提高小鼠血清中特异性的抗体滴度,而且在G3树枝状大分子的免疫剂量为100μg时,体液免疫效果最好。夹心ELISA实验结果表明,当G3树枝状大分子的使用剂量为100μg时,产生的IFN-γ、IL-2的浓度比同剂量铝佐剂组产生的IFN-γ、IL-2的浓度高,差异显著,因此表明当G3树枝状大分子的免疫剂量为100μg时,作为佐剂可以提高风疹亚单位疫苗的细胞免疫应答能力。对G3树枝状大分子作为疫苗佐剂进行安全性评价,体外MTT法检测T47D细胞的存活率,结果浓度分别为0.25 mg/mL,0.5 mg/mL,1 mg/mL,2 mg/m L的G3树枝状大分子都没有引起T47D细胞的死亡,因此G3树枝状大分子作为佐剂安全性较高。以上结果表明,基于β-环糊精合成的G3树枝状大分子作为风疹亚单位疫苗的佐剂,安全有效,有望为风疹疾病的预防和治疗奠定技术基础。
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