论文部分内容阅读
卡氏肺孢子虫肺炎是发生于免疫抑制宿主中的一种致命的机会感染性疾病,尤其好发于艾滋病、白血病、恶性肿瘤、器官移植、接受皮质激素等免疫抑制疗法的患者。人们对卡氏肺孢子虫肺炎的临床表现、诊疗、预后已经有了较深的了解,但对其特异性损伤呼吸器官功能的机制和途径知之甚少。本研究拟探讨卡氏肺孢子虫肺炎肺部细胞凋亡及其凋亡相关基因的表达和意义。 目的:探讨卡氏肺孢子虫肺炎肺部细胞凋亡及其凋亡相关基因caspase-3、TNF-α、Fas、Bax的表达和意义。 方法:wistar大鼠皮下注射地塞米松建立卡氏肺孢子肺炎模型。用ELISA法检测支气管肺泡灌洗液中TNF-α、IFN-γ和sIL-2R表达的水平。采用胰酶消化和免疫黏附法分离、纯化肺泡Ⅱ型上皮细胞,用Hoechst 33258染色荧光显微镜下检测凋亡的细胞。通过光镜、电镜、末端脱氧核糖核酸转移酶依赖的末端标记法来检测肺组织细胞凋亡的情况,同时用免疫组化SABC法来检测凋亡相关基因caspase-3、Fas、Bax的表达。 结果:支气管肺泡灌洗液中,卡氏肺孢子虫肺炎阳性组TNF-α、IFN-γ和sIL-2R的含量远高于阴性组和健康对照组(P<0.01)。Hoechst染色发现卡氏肺孢子虫肺炎大鼠分离、纯化的肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡的数量显著高于阴性组(P<0.01)。原位末端脱氧核糖核酸转移酶依赖的末端标记法(TUNEL)发现卡氏肺孢子虫肺炎阳性组大鼠肺组织凋亡的细胞数(42±4.82/HP)明显高于阴性组(2±1.96/HP)(P<0.01)。caspase-3在卡氏肺孢子虫肺炎大鼠中的阳性表达率为78.79%(26/33),在阴性组中阳性表达率为16.7%(2/16),caspase-3在卡氏肺孢子虫肺炎大鼠的表达显著高于阴性组(X~2=14.45,P<0.01)。Fas在卡氏肺孢子虫肺炎大鼠中的阳性表达率为60.61%(20/33),在阴性组中阳性表达率为8.3%(1/12),经统计学处理,Fas在卡氏肺孢子虫肺炎大鼠中的表达明显高于阴性组(X~2=9.961,P<0.05)。Bax在卡氏肺孢子虫肺炎大鼠和阴性组中的表达无明显差别(X~2=0.14,P>0.05)。卡氏肺孢子虫肺炎大鼠组中caspase-3和Fas的表达呈正相关(r=0.5641,P≤0.01)。