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地中海贫血是由于先天性基因缺陷致使人体不能正常合成血红蛋白珠蛋白而引起的一种遗传性血液病,血红蛋白H (HbH)病是临床常见的中间型a-地中海贫血,广泛分布于我国南方各省,至今尚无有效的治疗方法。导师吴志奎教授首次提出“中医肾生髓、髓生血是中医药治疗地中海贫血的理论核心”这一假说,采用补肾益髓法的代表方——益髓生血颗粒在广西高发区治疗地中海贫血30余年并取得了肯定的疗效,并从基因突变、调控珠蛋白基因表达、红细胞结构与功能等不同层面深入研究了疗效的分子机制,验证了该理论假说的客观性,使中医药治疗地中海贫血整体水平达到了新的高度。本研究在前期研究的基础上,以29例α-HbH病患者和血虚症模型小鼠为研究对象,将临床研究、临床试验研究与动物实验相结合,采用real-time PCR、RIA等相关技术从造血细胞因子的活性与表达方面探讨益髓生血颗粒治疗α-HbH病的作用机制,取得了以下研究结果：1主要结论1.1对29例α-HbH病患者的临床研究结果临床病例均来自于广西南宁303医院的门诊病历。29例符合纳入标准的α-HbH病患者经益髓生血颗粒治疗3个月,结果有4例脱落,25例完成整个疗程观察,其中24例有效,1例无效。24例有效病例的患者中医证候量化评分显示：潮热盗汗、心悸气短、咽干等治疗后1、2、3个月与治疗前比较均有明显改善(P<0.05)。咽干治疗后3个月与治疗后1、2个月也有明显改善(P<0.05)。面色萎黄、腰膝酸软、眩晕、耳鸣与治疗前比较无明显改善(P>0.05)。患者Hb、HbH含量在治疗后2、3个月与治疗前比较均有提高(P<0.05或P<0.01),Hb治疗后2、3个月与治疗后1个月比较也有明显提高(P<0.01)。患者RBC、Ret、PLT含量治疗后无明显上升(P>0.05)。研究表明：益髓生血颗粒能改善α-HbH病患者的外周血象,提高血红蛋白(Hb)含量,与临床中医症状的改善相一致。1.2对29例α-HbH病患者的临床试验研究结果1.2.1对24例有效病例血清中造血细胞因子活性与表达的检测发现：益髓生血颗粒治疗3个月后,患者造血细胞因子SCF和GM-CSF活性和表达疗后与疗前相比无明显增强(P>0.05)；IL-3活性和表达疗后比治疗前则明显减弱(P<0.05)。患者造血细胞因子mRNA PCR扩增产物琼脂糖电泳图谱表明,治疗后α-HbH病患者外周血SCF表达增加,IL-3表达减少。提示我们,益髓生血颗粒治疗α-HbH病疗效肯定,其疗效的分子机制可能与调节患者外周血造血细胞因子SCF、GM-CSF、IL-3的活性与表达有关。1.2.2对15例有效病例的外周血红细胞膜的抗氧化指标检测发现：经益髓生血颗粒治疗3个月后,患者红细胞膜上的抗氧化指标MDA含量有下降趋势,但不具备统计学意义(P>0.05), SOD、GSH-PX的含量上升,而且GSH-PX含量上升具有统计学意义(P<0.05)。研究表明：益髓生血颗粒能有效缓解α-HbH病患者红细胞的氧化损伤程度,从而改善无效造血的产生,这与临床观察和血液指标的检查结果相一致。1.3对60Co γ射线照射的血虚症模型小鼠的实验研究结果1.3.160Co γ射线照射后,小鼠外周血指标Hb、RBC、PLT均有明显下降,且在第7天达到最低值(P<0.01),阳性G-CSF、益髓生血颗粒各剂量组在照后第14天,均能明显升高外周血RBC数、Hb、PLT数量(P<0.01),研究表明益髓生血颗粒能有效提高血虚症模型的外周血象,缓解血虚症状。1.3.260Co γ射线照射后小鼠外周血血清中SCF、GM-CSF含量模型组与正常组比较有下降的趋势,阳性G-CSF、益髓生血颗粒各剂量组能提高血清中SCF、GM-CSF含量(P<0.05),小鼠外周血血清中IL-3含量模型组与正常组比较有上升的趋势,阳性G-CSF、益髓生血颗粒各剂量组能有效降低血清中IL-3含量,其中低剂量具有统计学意义(P<0.05)。这与临床研究益髓生血颗粒治疗前后α-HbH病患者造血细胞因子活性与表达的研究结果相一致。1.3.360Coγ射线照射后小鼠胸腺和脾指数与正常组相比有明显降低,具有统计学意义(P<0.05)：阳性G-CSF胸腺和脾指数与模型组相比有明显的上升,且具有统计学意义(P<0.01)；益髓生血颗粒各组均能提高照射小鼠的胸腺指数,但只有高剂量组有统计学意义(P<0.05)；益髓生血颗粒各剂量组能有效提高照射小鼠的脾指数,且各组均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。研究表明：益髓生血颗粒能有效提高血虚症模型小鼠的造血能力。这与外周血象的检查结果相一致。从造血细胞因子活性与表达方面探讨益髓生血颗粒治疗α-HbH病的作用机制,临床研究和实验研究取得了一致的结果。研究表明：益髓生血颗粒治疗α-HbH病,可提高患者的整体效应,患者临床症状的改善与血液学指标的提高相一致,其疗效的可能机制之一是通过调节造血细胞因子的活性与表达,进而改善造血微环境,减少红细胞氧化损伤,促进有效造血。研究结果进一步验证了中医肾生髓、髓生血理论治疗地中海贫血的客观性,为从分子水平揭示其理论内涵提供了科学依据。2本研究的创新点本研究以高发区α-HbH病患者为主要研究对象,把中医的理论思维与分子生物学前沿技术相结合,从造血细胞因子的活性与表达方面探讨益髓生血颗粒治疗α-HbH病的作用机制,为中药治疗地中海贫血提供了新的实验依据。