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目的:利用基因转染技术构建ATM稳定表达的ATM+-AT细胞株,观察外源性ATM蛋白对端粒酶活性、端粒酶逆转录酶(hTERT)表达的影响;研究电离辐射后剂量因素、时间因素对端粒酶活性、hTERT表达的影响;比较内、外源性ATM对端粒酶活性、hTERT表达影响的差异性;探讨hTERT表达对端粒酶活性的调控作用。方法:(1)利用电穿孔技术,将含有ATM基因cDNA的真核表达载体PEBS7-YZ5转染到AT细胞中,用潮霉素筛选以获得稳定表达细胞株,RT-PCR检测ATM mRNA的转录,Western blot检测ATM蛋白的表达;(2)以源于正常人皮肤的成纤维细胞系GM细胞(GM0639)为对照,应用端粒重复序列扩增技术(TRAP)与高效液相色谱技术(HPLC),定量分析细胞经0、1、3、5Gy 60Coγ射线照射后,AT、空载体AT、ATM+-AT和GM细胞端粒酶活性的变化;(3)以GM细胞为对照,应用TRAP和HPLC技术,定量分析细胞经3Gy 60Coγ射线照射后继续培养2、24、48、72h,AT、空载体AT、ATM+-AT和GM细胞端粒酶活性的变化;(4)以GM细胞为对照,应用RT-PCR和Western blot技术,观察细胞经0、1、3、5Gy 60Coγ射线照射后,AT、空载体AT、ATM+-AT和GM细胞hTERT mRNA和蛋白表达的变化;(5)以GM细胞为对照,应用RT-PCR和Western blot技术,观察细胞经3Gy 60Coγ射线照射后继续培养2、24、48、72h,AT、空载体AT、ATM+-AT和GM细胞hTERT mRNA和蛋白表达的变化。结果:(1)PEBS7-YZ5成功转染AT细胞,潮霉素筛选后获得稳定表达ATM的ATM+-AT细胞株,RT-PCR检测到ATM基因的转录,Western blot检测到ATM蛋白的表达;(2)未照射时,除GM细胞外,AT、空载体AT、ATM+-AT细胞均有端粒酶活性表达,但ATM+-AT细胞的端粒酶活性明显低于AT和空载体AT细胞(P<0.01),而后二者无明显差异(P>0.05);不同剂量电离辐射照射后,AT、空载体AT、ATM+-AT和GM细胞的端粒酶活性均呈剂量依赖性增强,且在相同剂量点,ATM+-AT细胞的端粒酶活性高于GM细胞(P<0.01),但低于AT和空载体AT细胞(P<0.01),而后二者无明显差异(P>0.05);(3)同一剂量电离辐射照射后细胞继续培养,AT、空载体AT、ATM+-AT和GM细胞的端粒酶活性均呈时间依赖性增强,且在相同时间点,ATM+-AT细胞的端粒酶活性高于GM细胞(P