论文部分内容阅读
本研究采用原位PCR技术对橡胶树死皮病抗性相关HbMyb1基因和抗白粉病基因连锁标记OPV-10390进行了物理定位，结果如下：
成功地建立了橡胶树染色体原位PCR技术体系。该原位扩增的PCR反应液总体积为50μl，各反应组分的终浓度为：1×buffer，4.5mMMgCl2，0.5mg/mlBSA，200μM的dATP、dCTP、dGTP，72μM的dTTP，4μMDIG-11-dUTP，5U/5μl的TaqDNA聚合酶，2.4μM的Primer；原位PCR扩增程序为：95℃预变性后进行20个循环反应，94℃变性30S，53℃(视引物Tm值)退火1min，72℃延伸70S，最后72℃继续延伸7min；扩增后的洗脱为0.1×PBS4～5min，0.1×SSC/(吐温20)2×5min。
利用本研究所建立的原位PCR技术，首次对橡胶死皮病抗性相关HbMyb1基因和抗白粉病基因连锁标记OPV-10390进行了染色体定位。在热研7-33-97和RRIM600叶片细胞不同分裂时期均扩增到1～2个信号。橡胶HbMyb1基因初步定位于7-33-97的第5号染色体长臂上，信号位点到着丝粒的百分距离为15.21。橡胶抗OPV-10390初步定位于RRIM600的第8号染色体长臂及11号染色体短臂上，信号位点到着丝粒的百分距离分别是16.99、49.58。
对热研7-33-97(RRIM600xPR107)和橡胶栽培品系RRIM600进行了核型分析。热研7-33-97的核型公式为2n=36=34m(2sat)+2sm，第15号染色体为亚中部着丝点染色体(sm)，其余17对染色体为中部着丝点染色体(m)，第6、7号染色体短臂具有随体，染色体绝对长度变化范围为3.14～6.36μm，相对长度为3.67％～7.44％，平均臂比为1.44，核型属2B型。RRIM600核型公式为2n=36=28m(2sat)+8sm，第11号、12号、14号及17号染色体为亚中部着丝点染色体(sm)，其余14对染色体为中部着丝点染色体(m)，第6、7号染色体短臂具有随体，染色体绝对长度变化范围为3.92～8.47μm，相对长度为3.45％～7.47％，平均臂比为1.60，核型属2B型。