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研究背景原发性支气管肺癌发病率和死亡率一直居于各种恶性肿瘤之首,尤其在发展中国家如中国,随着经济的发展,环境的破坏和老龄化人口的增多,肺癌的防控负担日益加重。非小细胞肺癌占肺癌的绝大多数,是肺癌防控的重中之重。非小细胞肺癌确诊时大部分为晚期,无手术治疗的机会,晚期非小细胞肺癌的治疗主要以化疗为核心的综合治疗。以第三代化疗药物联合铂类为主要的化疗方案虽然能为患者带来获益,但毒副作用较大,总体疗效已达瓶颈,难以有突破性进展。以表皮生长因子受体酪氨酸酶抑制剂为代表性的靶向治疗与传统化疗相比,能明显改善晚期非小细胞肺癌特别是肺腺癌患者的生活质量和总生存期,但大部分患者会在一年左右出现继发性耐药,即便采用针对耐药机制研发的新一代靶向药物,后续的再次耐药仍不可避免。寻找新的治疗靶点,探索新的耐药机制对于肺癌的防治具有重要意义。FAM83A（family with sequence similarity 83 member A）是FAM83蛋白家族中的一员,结构上包含高度保守的1699结构域,功能上可以调控表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）信号通路下游的丝裂原活化蛋白激酶（mitogen activated protein kinase,MAPK）和磷脂酰三磷酸肌醇/丝苏氨酸蛋白激酶（phosphatidyl triphosphate inositol/seronine protein kinase,PI3K/AKT）通路的活动,控制细胞的增殖和转化。目前已有多项研究论述了FAM83A在乳腺癌、胰腺癌等恶性肿瘤中可以促进癌细胞的增殖和侵袭转移,并导致EGFR酪氨酸激酶抑制剂（tyrosine kinase inhibitor,TKI）的耐药的产生。临床相关性研究也发现在这些恶性肿瘤中FAM83A高表达与较差的临床预后密切相关。FAM83A在肺癌中是否发挥促癌作用并在EGFR-TKI耐药机制中发挥作用并不清楚。肿瘤相关数据库（Oncomine）分析显示FAM83A在肺腺癌组织中表达增高并与较差的预后相关。基于此,我们推测FAM83A在肺腺癌中的发病中具有重要作用,开展FAM83A在肺腺癌中的相关研究,对于寻找肺腺癌新的潜在治疗靶点具有重要意义。研究目的1.观察FAM83A蛋白在肺腺癌中的表达状况,调查FAM83A的表达与临床病理特征及预后的关系。2.研究FAM83A基因对肺腺癌细胞的增殖和侵袭转移的影响。3.探讨FAM83A基因对肺腺癌上皮间质转化的影响机制研究方法86例石蜡包埋肺腺癌及癌旁组织标本用于构建组织芯片,联合组织芯片技术和免疫组织化学技术平行检测芯片标本FAM83A的表达;Western blotting方法检测五例新鲜肺腺癌组织及癌旁组织的FAM83A表达;卡方检验分析肺腺癌FAM83A表达与组织病理学特征的关系,Cox回归分析和Kaplan-Meier生存分析分析FAM83A表达与疾病预后的关系;Western blotting检测细胞系的FAM83A蛋白的表达;慢病毒感染肺腺癌细胞,RNA干扰（RNA interference,RNAi）技术抑制肺腺癌细胞FAM83A的表达;实时荧光定量PCR技术检测基因敲降效果;CCK8细胞增殖实验检测细胞增殖能力;细胞划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell细胞侵袭实验检测细胞侵袭能力;Westen blotting检测上皮间质转化相关分子标志物和转录因子的表达。研究结果1.Oncomine数据库生物信息学分析发现肺腺癌FAM83A转录水平上调。2.Western blotting蛋白检测结果显示新鲜肺腺癌组织FAM83A蛋白表达水平显著高于癌旁肺组织,P=0.036。3.肺腺癌组织芯片免疫组织化学方法检测结果显示FAM83A主要位于细胞浆中,癌组织中FAM83A的免疫组化染色指数SI显著高于邻近肺组,P<0.001;亚组分析显示III-IV期肺腺癌患者FAM83A表达高于I-II期患者,P=0.004。4.相关性分析显示FAM83A表达水平和临床分期（P=0.008）及淋巴结分级（P=0.008）显著相关;单因素Cox回归分析显示FAM83A高表达较低表达增加肺腺癌患者的死亡风险（风险比hazard ratio,HR:1.765,95%置信区间hazard ratio,CI:1.065-2.926,P=0.028）,多因素Cox回归分析显示FAM83A的表达水平是肺腺癌患者生存期的独立预测因素（HR:1.899,95%CI:1.085-3.323,P=0.025）;Kaplan Meier生存分析显示FAM83A高表达的患者（n=37）较低表达患者（n=49）具有更短的总生存期（P=0.024）。5.Western blotting检测结果显示A549、H1795细胞系FAM83A蛋白表达较高,H1395、Calu细胞系表达相对较低。RNA干扰技术对A549、H1795细胞系实施FAM83A基因敲减后,实时荧光定量PCR检测FAM83A m RNA表达量敲减组较对照组（未干扰组）显著降低,P<0.001。6.RNA干扰技术对A549细胞实施FAM83A基因敲减后其增殖活力相比于对照组（未干扰组）在各个时间点（0,12,24,48,72小时）均无显著降低,P>0.05;而H1795细胞实施FAM83A基因敲减后其增殖活力相比于对照组（未干扰组）在个各个时间点（0,12,24,48,72小时）均显著降低,P<0.001。7.RNA干扰技术对A549细胞实施FAM83A基因敲减后细胞划痕试验愈合面积较对照组（未干扰组）显著减小,P<0.01;H1795细胞实施FAM83A基因敲减后细胞划痕试验愈合面积较对照组（未干扰组）显著减小,P<0.01。8.RNA干扰技术对A549细胞实施FAM83A基因敲减后,Transwell细胞侵袭实验小室底膜上细胞计数较对照组（未干扰组）显著减小,P<0.01;H1795细胞实施FAM83A基因敲减后,Transwell细胞侵袭实验小室底膜上细胞计数较对照组（未干扰组）显著减小,P<0.001。9.RNA干扰技术对A549细胞实施FAM83A基因敲减后较对照组（未干扰组）,上皮间质转化（epithelia mesenchymal transition,EMT）上皮细胞标志物E-cadherin表达增强,间质标志物Vimentin表达减弱,EMT相关转录因子Snail表达减弱,P均<0.001;H1785细胞实施FAM83A基因敲减后较对照组（未干扰组）,EMT上皮细胞标志物E-cadherin表达增强,间质标志物Vimentin表达减弱,EMT相关转录因子Snail表达减弱,P均<0.001。研究结论1.FAM83A在肺腺癌中表达增高。2.在肺腺癌患者中高表达的FAM83A预示较高的临床分期和较差的预后,FAM83A可作为潜在的诊断和预后生物标志物。3.FAM83A调控肺腺癌增殖、侵袭和转移。4.FAM83A促进肺腺癌细胞上皮间质转化,FAM83A可能通过Snail途径调控肺腺癌细胞上皮间质转化。