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本试验以猪为研究对象，利用屠宰场废弃的猪卵巢，从中获取卵母细胞后，进行体外成熟培养和冷冻保存研究。主要研究了促性腺激素、血清类型、猪卵泡液对猪卵巢卵母细胞体外成熟的影响，比较了从卵巢上卵泡φ＜2mm、2～5mm、＞5mm分别获得的卵母细胞体外成熟能力的差异，以及培养过程中激素的存在时期对卵母细胞体外成熟的影响；并对不同发育阶段猪卵母细胞的冷冻保存进行了研究。为下一步猪的克隆和转基因研究提供卵母细胞来源，并为其它动物特别是濒危野生动物的保种提供技术参考。结果表明： 1．促性腺激素在卵母细胞体外成熟过程中起着重要作用。培养液中添加10IU／mlPMSG和10IU／ml hCG组卵母细胞的总成熟率(88.78％)极显著高于对照组(60.01％)(P＜0.01)。 2．培养液中添加10％NCS和10％ECS均能有效地促进猪卵母细胞的体外成熟，其中，添加ECS的成熟率(72.86％)显著高于NCS(62.21％)(P＜0.05)。 3．在体外成熟培养液中添加10％pFF抑制卵母细胞的体外成熟。不添加pFF组的A级成熟率(53.65％)和总成熟率(79.60％)均显著高于添加pFF组(分别为29.81％和68.51％)(P＜0.05)。 4．不同直径大小卵泡中的卵母细胞体外成熟能力不同。大卵泡(φ＞5mm)和中等卵泡(φ2～5mm)中抽取的卵母细胞体外成熟率显著高于小卵泡(φ＜2mm)卵母细胞(P＜0.05)。中等卵泡卵母细胞体外成熟率最高(79.39％)，但与大卵泡卵母细胞(75.30％)差异不显著(P＞0.05)。 5．在猪卵母细胞体外成熟过程中，成熟前期激素的存在对卵母细胞的成熟是必需的，而在成熟培养后期去掉激素可以促进卵母细胞成熟。在猪卵母细胞体外培养48h时，培养前24h培养液中加入激素，后24h去掉激素，卵母细胞的A级成熟率(51.73％)和总成熟率(83.25％)最高，极显著高于前24h不加激素，后24h添加激素培养的成熟率(P＜0.01)，也显著高于不含激素的培养液连续培养48h的成熟率(P＜0.05)，但与添加激素连续培养48h组成熟率差异不显著(P＞0.05)。 6．本实验对不同发育阶段的猪卵母细胞的冷冻保存进行了研究。结果表明，用1.6MPROH作为冷冻保护剂，采用慢速冷冻保存方法，培养成熟后冷冻保存的卵母细 南京农业大学硕士学位论文：猪卵母细胞体外成熟与冷冻保存的研究 胞成活率（35．59O）高于培养前（24．64O）和培养24h后（23．36O）冷冻保存组， 差异显著（P＜0．05）。培养 24h（77．22O）和培养成熟后（72．slo）冷冻保存组， 其卵母细胞解冻后的形态完整率均显著高于培养前冷冻保存组（53二4％） （P＜0．05）。从而说明，猪 M 11期卵母细胞的抗冻能力高于 GV期和培养 24h的卵 母细胞。