小反刍兽疫病毒(Pestedes Petits Ruminants Virus,PPRV)属副黏病毒科(Paramyxoviridae)、副黏病毒亚科(Paramy xovirinae)、麻疹病毒属(Morbillivirus),其感染山羊、绵羊和野生小反刍动物而引起的小反刍兽疫(Pestedes Petits Ruminants,PPR)是一种以发热、口炎、腹泻为特征的急性、烈性、高度接触性传染病,该病传播迅速,病死率高,给世界养羊业造成了重大经济损失。我国首次PPR疫情于2007年7月在西藏阿里地区发生,但在随后的几年,疫情仅限于西藏地区。2013年11月30日,新疆伊犁哈萨克自治州出现新的疫情,且疫情迅速向外蔓延。迄今为止,我国已有25个省、自治区、直辖市发生小反刍兽疫疫情,给我国养羊业造成巨大经济损失。目前,PPR的防控是在加强执法监督、疫情监测和提高预警能力的基础上采取综合防控的措施,一旦疫情发生,则在确诊的基础上采取封锁和扑杀等措施,以防止疫情的扩散。因此,快速、高效、特异性强、灵敏度高的PPRV检测方法的建立,将为PPR的快速诊断和有效防控提供技术支持。基于此,本研究主要完成了以下工作:(1)小反刍兽疫病毒武威分离株N基因的扩增及序列分析参照GenBank中PPRV Nigeria 75/1株N基因序列(HQ197753)设计引物,应用RT-PCR扩增获得PPRV武威分离株N基因全长。并在测序的基础上完成了其与Gen Bank中的53株PPRV N基因序列的生物信息学分析。(2)小反刍兽疫病毒武威分离株N基因的原核表达及多克隆抗体的制备将PPRV武威分离株N基因克隆至pET-28a(+),构建原核表达质粒pET-PPRV-N,并将其转化大肠杆菌Rosetta(DE3),经IPTG诱导后,获得重组蛋白的可溶性表达,表达产物相对分子量大小约为57.8 kDa。纯化表达产物免疫BALB/c小鼠,应用ELISA和Western blot对抗血清的效价、反应原性进行检测,结果表明,PPRV武威分离株N蛋白具有良好的免疫原性及反应原性。(3)小反刍兽疫病毒武威分离株N蛋白单克隆抗体的制备取免疫后BALB/c小鼠脾细胞,与骨髓瘤细胞(SP2/0)进行融合,经多次亚克隆筛选获得2株能稳定分泌PPRV N蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株2B7及3I4;ELISA检测结果表明,杂交瘤细胞2B7和3I4产生的单克隆抗体具有特异性;亚型鉴定结果表明两株细胞分泌单抗重链均为IgG2b型、轻链均为κ型;应用两株杂交瘤细胞腹腔注射BALB/c小鼠,所得腹水,效价分别为1:51 200和1:25 600。