拟态弧菌全菌灭活疫苗对黄颡鱼的免疫保护效果

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珠三角地区是黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)和斑点叉尾鮰(Ietalurus Punetaus)养殖的重要地区之一。但自2011年以来,一种由拟态弧菌(Vibrio mimicus)感染引起的皮肤溃烂病在黄颡鱼和斑点叉尾鮰等鲇形目养殖鱼类中快速蔓延。此病在发病鱼塘中的感染率可达90%,感染后死亡率高达80%,给鲇形目鱼类养殖业造成了严重的经济损失。然而,针对该病尚无有效的防控措施。本论文制备了一种拟态弧菌全菌灭活疫苗,研究了浸泡免疫和注射免疫的保护效果,通过转录组测序分析了疫苗免疫对黄颡鱼基因表达的调控作用,主要实验结果如下:一、复苏保种的鱼源拟态弧菌,扩大培养并经5%的福尔马林灭活后,稀释到所需浓度,再与弗氏佐剂混合制备全菌灭活疫苗,该疫苗的安全性和稳定性较好。二、采取1×107和1×106 CFU/10L两种抗原浓度、以及1小时和2小时两个浸泡时间,对黄颡鱼进行浸泡免疫,并于首免后第二周进行加强免疫。免疫后第4周攻毒发现:浸泡免疫未能使黄颡鱼获得抗拟态弧菌的免疫保护力。三、采用1×109 CFU/mL、1×107 CFU/mL和1×105 CFU/mL这3种抗原剂量的疫苗进行腹腔注射免疫,在首免后的第2周加强免疫一次,并于首免后第4、6和8周进行保护力实验。结果显示:在第4和第8周的保护力实验中,1×109 CFU/mL组的相对保护率可达100%;但在第6周时,1×109 CFU/mL组的相对保护率仅有23%(使用较高的攻毒剂量);两个低剂量免疫组的保护率相对较低。四、腹腔注射免疫后第4周,采集1×109 CFU/mL实验组和对照组黄颡鱼的脾脏进行转录组测序。结果发现:与对照组相比,免疫组有1519个基因的表达量发生了变化,其中与抗原递呈相关的MHC I和II类分子、与鱼类抵抗病原入侵相关的补体C7的和与机体应激应答相关的Hsp75和Hsp90的表达量在免疫后出现显著上调。综上所述,拟态弧菌全菌灭活疫苗注射免疫能给予黄颡鱼免疫保护,且保护效果与免疫剂量相关,但该保护不能耐受超高的攻毒剂量;此外,疫苗免疫能调节黄颡鱼免疫相关基因的表达。
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