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目的:通过噬菌体展示肽库技术来寻找小鼠galectin-7蛋白分子的受体。 方法:将Galectin-7蛋白分子用生物素标记,再与M13噬菌体展示肽库进行液相结合,淘选出来的噬菌体再进行扩增,并测定滴度,保证为下一轮提供淘选的的噬菌体数不低于1011数量级,如此淘选-扩增-淘选,共进行3~4轮筛选。从最后一轮筛选后的阳性克隆的平板中随机挑选10个克隆噬菌斑进行大量扩增(为尽量避免随机挑取的菌斑含有相同的DNA,平板中噬菌斑的数量应不多于100个),再提取 M13噬菌体的DNA并测序,将测序后的结果用Blast软件对比找出插入的外源基因片段,并运用生物信息学方法从小鼠基因数据库(GeneBank)中对比与外源插入基因片段匹配的蛋白;将这些匹配蛋白与 Galectin-7进行免疫共沉淀反应,通过 Western-blot最终鉴定与靶分子Galectin-7结合的目标蛋白。 结果:通过第一轮预实验淘选,得到了与Galectin-7蛋白分子结合的阳性噬菌体展示肽克隆,说明在肽库中存在与Galectin-7分子结合的短肽。在接下来的实验每一轮淘选之后的测定滴度中,都有阳性克隆噬菌斑的出现,即存在与Galectin-7分子具有一定亲和力的短肽。通过筛选和扩增后提取 M13噬菌体的DNA并测序及Blast软件分析对比,找到了3个外源插入基因片段,并从小鼠基因数据库(GeneBank)中对比,找出了8个与Galectin-7具有潜在可能结合的目标蛋白。 结论:Galectin-7是一种在免疫反应、细胞凋亡、肿瘤、损伤愈合等方面有着重要作用和潜在作用的半乳糖结合蛋白。其在炎症、自身性免疫疾病和移植排斥反应等各种免疫系统相关疾病的病理生理机制尚未明确,如果能找到与其相互作用的生物分子(如受体),则可以为相关疾病的发病机制的认识及指导临床诊疗提供重要科学依据。