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狂犬病是由狂犬病病毒(rabies virus，RV)引起的一种严重侵害中枢神经系统的急性人畜共患传染病，它是迄今为止人类病死率最高的烈性传染病之一，一旦发病几乎100％死亡。近年来，狂犬病在我国的发病又有上升趋势，面临严峻的疫情，对狂犬病病毒的主要家畜宿主(主要是犬)进行免疫是预防和控制狂犬病的最具成本效益的战略。但其宿主免疫是否有效，最准确的方法就是监测其体内的中和抗体水平。 鉴于此，本研究利用现代免疫学技术建立了检测犬源狂犬病毒抗体的快速通用型方法。首先利用原核表达系统制备了大量高纯度的重组糖蛋白RV G3。且将本教研室保存的一株杂交瘤细胞注入小鼠体内制备了大量抗狂犬病毒糖蛋白的单克隆抗体，并利用磁珠Protein G亲和层析法进行了纯化。 以纯化的重组蛋白RV G3作为诊断抗原，建立了检测犬源狂犬病毒中和抗体的间接ELISA方法。通过优化反应条件确定了抗原的最佳包被浓度为8 mg/L；血清最佳稀释度为1:100；最适的封闭剂为胎牛血清；酶标二抗最适工作浓度为1:3000。此方法的检测临界值为0.276，批内和批间重复性的变异系数均小于10%，其灵敏度为1:640，且不与其他犬源病毒抗体发生交叉反应。利用此方法检测136份临床样品，并与商品化ELISA试剂盒进行比较，两者的总体符合率达到95.6%；与FAVN方法的符合率达到84.8%。 在此方法的基础上，以纯化的一株抗狂犬病毒糖蛋白的单克隆抗体作为捕获抗体对间接ELISA进行改良，建立了一种夹心ELISA方法。通过优化反应条件确定了捕获抗体的最佳包被浓度为1:1000；抗原包被量为0.625 mg/L；血清最佳稀释度为1:50；其他的条件与间接ELISA相同。建立的此方法的检测临界值为0.291，批内和批间重复性的变异系数均小于10%，灵敏度为1:400，且与其他犬源病毒抗体无交叉反应。利用此方法检测90份临床样品，与商品化ELISA试剂盒进行比较，两者的符合率88.9%；且与FAVN的相关性为80.4%。 本研究成功地纯化了单克隆抗体，并以纯化的重组蛋白和单克隆抗体作为包被试剂，建立了检测犬源狂犬病毒中和抗体的间接ELISA方法和夹心ELISA方法，两种方法都具有特异性强，重复性好，敏感性高的特点，为犬源狂犬病毒中和抗体检测提供了简单快捷的检测方法。