论文部分内容阅读
上世纪80年代疯牛病在欧洲暴发，对全球经济造成很大的损失，更为严重的是它能通过食物链传染给人，造成人的新型克雅氏病(nvCJD)。在该类疾病的发生、发展过程中，PrP作为模板诱导正常分子PrP发生构象改变，产生大量具有蛋白酶抗性的PrP并在中枢神经系统聚集而发病。目前人们发现TSE可以水平传播，但人们对于TSE是否能垂直传播仍未定论。生殖系统与垂直传播有密切关系，研究生殖系统中细胞型朊蛋白的表达对于探讨TSE能否通过生殖系统而垂直传播具有重要的意义。研究内容如下：
1.用实时定量RT-PCR对PrP在生殖系统不同组织中的表达进行检测，我们采用GAPDH基因做内参照基因的相对荧光定量RT-PCR方法，对目的基因和内参基因分别构建标准重组质粒，制备标准曲线，利用标准曲线对采集雌雄奶牛生殖系统的12个不同组织PrP基因表达进行定量。试验结果表明奶牛的雌性生殖系统和雄性生殖系统的各组织均有PrP基因表达，其中雄性奶牛的睾丸、附睾和输精管呈现高表达，分别为1.16±0.0010、1.81±0.0056、0.68±0.0038；前列腺，精囊腺和尿道球腺呈现中等表达，分别为0.47±0.0018、0.25±0.0007、0.28±0.0007；阴茎呈现低表达，为0.18±0.0017；雌性奶牛的子宫、子宫阜呈现高表达，分别为2.53±0.0008、1.75±0.0098；卵巢和输卵管呈现中等表达，分别为1.55±0.0038、1.45±0.0064；阴道呈现低表达，为0.57±0.0036。本研究为阐释PrP基因在奶牛生殖系统的正常表达，为研究疯牛病是否可以通过生殖系统垂直传播的奠定理论基础。
2.用免疫组织化学的方法对奶牛生殖系统中朊蛋白进行定位研究，结果表明：在雌性奶牛的卵巢、子宫阜和子宫呈现阳性，输卵管呈弱阳性。雄性奶牛的睾丸、附睾呈现弱阳性，其他器官均为阴性。这说明了在这些组织中有正常的PrP的存在，为探索Prion致病机理、感染途径提供基础数据，也为朊病毒是否可以垂直传播提供了基础数据。
3.为研究奶牛生殖系统与朊病之间的关系，本文采用Westernblot对奶牛生殖系统中朊蛋白的含量进行研究，结果表明：在雌性奶牛的卵巢、子宫阜和子宫呈现阳性，输卵管呈弱阳性。雄性奶牛的睾丸、附睾和输精管呈现阳性，精囊腺呈弱阳性，阴茎、前列腺和尿道球腺呈现阴性。这说明了在这些组织中有正常的PrP存在，为探索奶牛生殖系统内朊蛋白与疯牛病的发生的组织相关性提供基础数据，也为朊蛋白是否可以垂直传播提供了基础数据。