猪的病毒性传染病是猪病中爆发快而多的传染病,其特点是传播速度快、流行广,多呈混合感染,可引起严重的免疫抑制和繁殖障碍等临床症状,给养猪业带来巨大的经济损失。猪瘟（classical swine fever,CSF）、2型猪圆环病毒（porcine circovirus type2,PCV2）、猪繁殖与呼吸综合征（porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS）上述三种疾病都给养猪业带来了巨大的经济损失,严重影响着畜牧业的发展。因此,建立一个准确、快速的诊断方法,对养猪业以及与养猪业相关的公共卫生有着极其重要的作用。液相芯片检测方法是由美国Luminex公司通过基因芯片技术与流式细胞仪技术相结合而开发的新型生物芯片技术。该技术创新性的将荧光编码的微球作为反应载体,微球悬浮于液相环境中,为生物大分子的反应提供了接近自然状态的反应条件。本研究旨在建立一种快速,可重复、高特异性和高准确度的猪病毒病IgG抗体单一荧光微球免疫学检测方法,并在此基础上进行科学整合建立三种疾病IgG抗体多重荧光微球免疫学检测方法。首先应用p MAL-c5x和p ET-32a原核表达载体,构建了p MAL-c5x-CSFV-E2、p MAL-c5x-PCV2-Cap和p ET-32a-PRRSV-NSP7重组质粒,获得了CSFV-E2、PCV2-Cap融合MBP和His标签的重组蛋白和PRRSV-NSP7融合了His标签的重组蛋白,对重组蛋白进行SDS-PAGE与Western blot分析;经Ni2+柱亲和层析纯化,获得具有良好免疫原性与抗原性的重组蛋白,为进一步荧光微球免疫学检测技术（fluorescent-microbead immunoassay,FMIA）方法的建立奠定了前提基础。将CSFV-E2、PCV2-Cap和PRRSV-NSP7重组蛋白作为抗原分别与60、40、10号珠微球偶联得到E2-60号、Cap-40号、NSP7-10号偶联复合体,以其捕获载体,分别建立CSFV-E2、PCV2-Cap和PRRSV-NSP7 IgG抗体FMIA检测方法。当通过单一方法进行检测时,单克隆抗体的最小检测浓度为1ng/m L,CSFV、PCV2、PRRSV血清稀释度分别在1:100、1:50、1:200时MFI（Median Fluorescent Intensity）达到最大值;与猪中常见的其他疾病阳性血清无交叉反应;CSFV、PCV2和PRRSV单一IgG抗体FMIA的平均批内变异系数分别为7.6%、6.4%、3.2%,平均批间变异系数分别为6.9%、6.7%、4.2%。对临床血清样本结果检测经ROC（receiver operating characteristic,ROC）曲线分析显示:CSFV、PCV2和PRRSV单一IgG抗体FMIA的灵敏度分别为98.9%、99.0%、94.9%,特异性分别为96.8%、91.3%、91.1%;MFI临界值为5939、2882.5、5991.5时,荧光微球免疫学检测法与ELISA均可以反映同一指标。在单一FMIA的基础上,将CSFV、PCV2、PRRSV微球偶联复合体置于同一反应体系中,建立并验证了可用于同时检测CSFV、PCV2、PRRSV抗体的三重FMIA方法,它与单个检测方法结果呈线性相关,可以反映同一指标。综上所述,本研究使用原核表达载体p MAL-c5x和p ET-32a成功构建了p MAl-c5x-CSFV-E2、p MAL-c5x-PCV2-Cap和p ET-32a-PRRSV-NSP7重组质粒。通过诱导表达出可溶的重组蛋白,以其为抗原与微球偶联,分别建立CSFV、PCV2和PRRSV IgG抗体单一FMIA检测方法,并在此基础上建立了多重FMIA检测方法。该方法的建立可为进一步建立猪病毒病抗体多重检测方法奠定实验基础,为其他动物疫病抗体的新型血清学诊断技术的建立提供思路。