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研究背景乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)感染是一项全球性的公共卫生挑战,全球仍有超过2.5亿慢性HBV感染者。中国是乙型肝炎的高发国家之一,据估计中国HBV感染者占全球的1/3以上,可谓是实现2030年全球消除乙肝病毒目标过程中,中国是关键,因此在HBV感染率相对较高的中国,HBV的相关研究正受到越来越多的关注。虽然现有的抗病毒治疗方案可以显著减少血清和肝组织中的HBV载量,但由于肝细胞核内存在具有转录活性的共价闭合环状DNA(cccDNA),不能被清除,成为慢性乙型肝炎难治和停药难且停药后易复发的原因之一。因此我们致力于从基因及细胞因子入手研究慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB),旨在探究CHB发病机制及寻找新的治疗靶点。已有研究证实在HBV感染过程中,HBV本身并不导致直接的细胞病变,而是自身免疫反应和宿主对其感染的肝细胞的反应直接损害了肝细胞,或者间接通过抗体依赖的细胞毒性介导肝损伤。辅助性T细胞(Th)17是独立于Thl和Th2的CD4+T细胞。有大量证据表明Th17及其分泌的白细胞介素17(IL-17)在疾病的发展过程中发挥了关键作用,IL-17(IL-17A)可以动员、招募和激活中性粒细胞,导致大规模组织炎症,促进类风湿关节炎和多发性硬化症等自身免疫性疾病的进展。白细胞介素-23(IL-23)是IL-12细胞因子家族的成员,主要由巨噬细胞和树突状细胞表达。它被认为对Th17的增殖和分化至关重要。IL-23受体(IL-23R)由T细胞和NK细胞共同表达,是IL-23的特异性受体,通过与IL-23的结合在免疫性炎性疾病的发病过程中发挥重要作用。大量证据表明IL-23/IL-23R信号通路在炎症性肠病(IBD)、银屑病和其他免疫疾病中发挥促炎作用。FOSL2/Fra2是活化蛋白-1(AP-1)转录因子家族成员,是Th17作用方案的核心组成部分。以前的研究表明,FOSL2可以通过调节T细胞的生物学行为和功能来影响机体的免疫状态。也有研究表明,在炎症发生过程中,FOSL2表达下调。目前对FOSL2的认识还不全面,对其在肝炎等肝病中的作用还没有具体研究。根据以往的研究结果,我们推测FOSL2可能参与了 CHB的发生发展。本研究旨在通过研究FOSL2及IL-17、IL-23、IL-23R等细胞因子在CHB患者中的表达水平及可能的调控机制,初步探讨FOSL2在CHB发生发展中的作用。研究目的已有研究证实FOSL2可能通过参与Th17分化和调控下游基因影响疾病进展,但其在慢性乙型肝炎患者中的具体作用尚不清楚。本研究旨在探讨FOSL2、IL-17、IL-23和IL-23R mRNA表达在CHB发生发展中的作用,为寻找新的治疗靶点奠定基础。研究方法本研究共纳入111例CHB患者和39例健康对照者(HCs)。本研究纳入的CHB患者诊断标准符合《慢性乙型肝炎防治指南(2019年版)》,均为乙肝表面抗原(HBsAg)阳性6个月以上。其中11例患者被排除,原因如下:7例肝癌患者,2例酒精性肝病患者,1例戊型肝炎病毒感染患者,1例自身免疫性肝病患者。最终纳入100例CHB患者。HCs来自于39名健康志愿者。其血清免疫学检查、肝功能检查等均阴性,排除肝脏疾病及肿瘤,且无其他呼吸、心脑血管、泌尿等其他系统疾病。采集所有研究对象的空腹外周静脉血,提取外周血中的单个核细胞(PBMCs),从PBMCs中提取RNA,并对RNA进行逆转录。我们通过实时定量聚合酶链式反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)来检测FOSL2、IL-17、IL-23、IL-23R mRNA 在 PBMCs 中的相对表达量。统计方法:本项研究中所涉及的连续变量采用中位数或四分位数表示。分类变量则用相对频率表示。使用Kolmogorov-Smirnov检验来检验数据是否呈正态分布。采用卡方检验比较分类变量,采用Mann-Whitney U检验进行比较定量变量。变量之间的相关性采用spearman相关性分析进行比较。本研究中,我们定义P值<0.05为差异有统计学意义。研究结果1.CHB患者外周血中FOSL2 mRNA相对表达明显低于HCs组(P<0.001),IL-17、IL-23、IL-23R mRNA 表达水平明显高于 HCs 组(P=0.005、P=0.007、P=0.001)。2.FOSL2 表达下调与 IL23 无显著相关(P=0.935,r=-0.008),但与 IL-17(P<0.001,r=-0.349)、IL-23R(P<0.001,r=-0.366)呈显著负相关。3.FOSL2 mRNA水平与 ALT(r=-0.326,p=0.001)、AST(r=-0.287,p=0.004)、HBV DNA载量(r=-0.229,p=0.022)呈负相关,但与患者性别(r=0.143,p=0.155)、年龄(r=0.086,p=0.396)、HBs Ag(r=0.177,p=0.080)、HBe Ag(r=-0.146,p=0.150)、GGT(r=-0.069,p=0.495)、AKP(r=-0.088,p=0.388)、TBIL(r=-0.029,p=0.777)、ALB(r=0.028,p=0.783)、BUN(r=-0.021,p=0.838)、Cr(r=-0.082,p=0.432)、PT(r=0.037,p=0.713)、PTA(r=-0.016,p=0.855)之间的相关性却无明显统计学意义。结论1.CHB患者FOSL2 mRNA表达下调,IL-17、IL-23、IL-23R mRNA表达水平升高,且FOSL2表达下调与IL-17、IL-23R呈负相关。这提示FOSL2表达下调可能通过上调IL-17和IL-23R的表达诱导炎症细胞因子IL-23信号通路的过度激活。2.FOSL2 mRNA水平与ALT、AST、HBV DNA载量呈负相关。这些指标反映CHB感染现状及疾病严重程度,可能提示我们FOSL2表达下调参与CHB的发展,为我们进一步研究CHB发病机制及寻找新的治疗靶点提供思路。